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westernblot上样原则
做好
westernblot
需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
2.在电转仪上制作“三明治”结构转移膜,最下面放三层滤纸,然后依次放PVDF膜,胶,三层滤纸,用玻璃棒轻轻赶走气泡(注意上下三层滤纸之间不能接触,否则易造成短路)。盖上盖子,根据膜的总面积调整电流,电转2h。 3.在电转的同时,可以配制以下液体,事先根据膜的数量计算好所需体积: 以一块膜为例,封闭5ml+稀释一抗4...
westernblot
的原理及操作步骤,应用有哪些
答:
原理
Western Blot
与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其...
WesternBlot
基本原理及步骤
答:
上样时,
先将样品顺离、涡旋、顺离,使其充分混匀,量取的样品量一定要准确,枪头要垂直进入孔道,匀速将样品注入孔道
。电泳时,电泳槽盖盖时注意红色表对红色边,黑色边对黑色边,切勿盖反。如若盖反,样品则会往上电泳。5、转膜时,依次放入海绵、三层滤纸、NC膜、胶、三层滤纸、海绵,顺序不可...
Western Blot
时,
上样
量是多少由什么决定
答:
用westernblot做NF-KB定量测定因为NF-KB在总蛋白中的含量不到0.1%,
建议将样品浓缩后再点样NF-KB通常每泳道要上样30~50ug
。但如果样品量太少了,可以通过高浓度1抗孵育并增加曝光时间来解决所以用westernblot做NF-KB定量测定,一般需要的上样量是30~50ug ...
求胃癌细胞的
western blot
步骤,可以直接写在小论文上发表的简洁版_百度...
答:
8. 取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度),并加等体积的2×电泳加样缓冲液 9. 沸水浴中3分钟 10.
上样
11. 电泳(浓缩胶20mA,分离胶35mA)12. 电转膜仪转膜(100mA 40分钟)13. 膜用丽春红染色,胶用考马斯亮蓝染色 14.
Westernblot
试剂盒显色 15. 分析比较记录
western blot
的...
western上样
量10ug可以吗
答:
可以。1、抗体灵敏度:
Westernblot
实验中使用的抗体具有较高的灵敏度,能够检测到低浓度的抗原,因此,即使
上样
量较低,抗体也能够识别并结合目标抗原,形成免疫复合物。2、蛋白纯度:在Westernblot实验中,目标蛋白是从复杂的蛋白质混合物中分离出来的,蛋白纯度较高,那么即使上样量较低,也能得到较好的...
western blotting
的原理、操作步骤及意义
答:
10.
上样
11. 电泳(浓缩胶20mA,分离胶35mA) 12. 电转膜仪转膜(100mA 40分钟) 13. 膜用丽春红染色,胶用考马斯亮蓝染色 14.
Westernblot
试剂盒显色 15. 分析比较记录
western blot
的实验步骤及注意事项的资料 1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。 1)转移缓冲液洗涤凝胶和...
westernblot
内参GAPDH成功了
视频时间 1:40
做
westernblot
时,孔里面总是有一些胶,
上样
上不上去是怎么回事?
答:
等PAGE胶凝固充分再拔梳子 在
上样
前,先用枪头吹打一下孔,把里面的脏东西吹出来,上样会好一些。
Western blot
实验最常见的10个问题及解决方案
答:
在
Westernblot
发光检测中常见的问题之一就是目的蛋白信号弱或无。首先考虑是否转膜不充分/过转,如果是,则要优化转膜条件;其次,在转膜合适的前提下考虑是否抗体-抗原敏感性过低,也可能是底物HRP或底物活性降低,可以通过加大
上样
量/提高抗体浓度/使用敏感底物/延长压片时间解决。凝胶太厚,曝光时间短也会...
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