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westernblot上样原则
westernblot
内参蛋白什么时候加
答:
内参检测的时候加。在WB实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白
上样
电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等常规步骤以外,还需要极其关键的一步,那就是内参检测,通过内参蛋白的表达量作为参照,校正蛋白定量和上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
westernblot
膜干了怎么办?
答:
膜干了以后可以通过浸泡甲醇恢复,转膜过程发生干膜也可以这样,但是会对结果有一定影响。就像楼上说的,孵育过抗体再晾干就不能strip了,一般stripping 试剂盒说明书都有强调这个。如果要保存膜可以浸泡在PBS或TBS中,4度放置。试剂盒:用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。一般医院、...
免疫组化和
westernblot
有什么区别
答:
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。2、组织定位不同:免疫组化在组织定位和定性上比较准确,但是在定量上不够准确。
westernblot
因为有内参标定,所以在定量上要更加准确,但是在组织定位上不如免疫组化。
什么是
Westernblot
法及Westernblot法应用
答:
对于蛋白质来说,通常使用的探针是抗体,它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。
Westernblot
法的主要优点在于,它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印...
western
结果怎样统计分析
答:
如果样品量充分,可以先检测内参,观测样品间内参显色条带是否一致,根据差异大小调整各样品的
上样
量重新进行
WesternBlotting
实验,至内参量一致为止;若内参一致,即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。
westernblot
结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证...
blot
时电泳时的条带呈斜行(直线)是咋回事
答:
跑
westernblot
时电泳时的条带呈斜行原因很多 主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀,造成条带未能直线跑完 电泳凝胶中混入气泡,造成条带被挤压倾斜 也可能是样品缓冲液有干扰,造成条带迁移率不统一 另外
上样
量过大,被其他泳道挤压也有可能
Western
免疫印迹的原理
答:
与Southern或Northern杂交方法类似,但
WesternBlot
采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上...
western blot
图中,IP IB Flag HA是什么意思
答:
能够在细胞中表达,最左边的图是用带有Flag标签的VEGFR拉p85及其研究片段,从图中可以看出,p85被拉出,而其研究片段没有被拉出,中间的图是反过来用p85及其研究片段拉VEGFR,同样可以看出p85可以把VEGFR拉出,而其研究片段没有被拉出,结论是VEGFR与P85存在相互作用,但是相互作用的位点不在其SH2上 ...
请教
Western Blot
中配胶的问题
答:
western blot
中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量 不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样,比如15%的分离胶更适合45kda的分目的蛋白,而10%的分离胶更适合70kda的目的蛋白 而因为western blot的膜应该是完全覆盖sds page的凝胶,所以不用太担心条带在凝胶上位置偏上活偏下 所以...
westernblot
原理及过程
答:
westernblot
原理及过程如下:
Western Blot
法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,...
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