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westernblot上样原则
考马斯亮蓝与pas染色液反应
答:
westernblot
电泳后,为什么要考马斯亮蓝染色,直接转膜不行吗?WB的胶用考马斯亮蓝染色,有为了确定你的目的条带电泳情况目的,还有一个目的,就是跟用丽春红染摸一样的作用,看转膜的效率。也就是看你的目的条带是否都转移到你的膜上了。这步染色完全可以省略,一般都可以用预染Marker来进行转膜观察...
转录组证据显示百岁老人的自噬溶酶体功能增强
答:
由于CEN特异性基因存在于基因过度表达与延长寿命之间的相关而非因果关系中,我们研究了wipi1在转基因果蝇中的作用,并观察到与对照蝇相比,wpi1基因在果蝇中过表达的寿命延长。qrt-PCR和
westernblot
检测的转基因表达证实了转基因的表达。这一结果表明,至少溶酶体自噬基因在CENs中的过度表达很可能是延寿的...
跑
westernblot
时电泳时的条带呈斜行是咋回事
答:
跑
westernblot
时电泳时的条带呈斜行原因很多 主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀,造成条带未能直线跑完 电泳凝胶中混入气泡,造成条带被挤压倾斜 也可能是样品缓冲液有干扰,造成条带迁移率不统一 另外
上样
量过大,被其他泳道挤压也有可能
westernblot
的原理及操作步骤,应用有哪些
答:
原理
Western Blot
与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其...
westernblot
内参加在哪里
答:
westernblot
内参加在于所有加样的孔道内因为内参是样品组分之一~区别内参与目的蛋白的是其分子量的差异~蛋白处理:此步骤是关键,蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞,3000rpm 3min离心,加入含蛋白酶抑制剂(现做现加)的细胞裂解液(本实验室选择RIPA,1×106/L细胞对应100ul),枪尖反复吹吸裂解...
Western blot
实验技术及常见问题分析?
答:
Western blot
注意事项和常见问题: 1 我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢? 答:有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全,可以适当提高SDS 浓度,同时将样品煮沸时间延长; 也不排除你的抗原浓度过高,这时再加入适量
上样
缓冲液即可。 2 我做的蛋白质分子量很小(10 KD),请问怎么做WB? 答:可以选择0.2 μm...
western
印迹的步骤
答:
互联网上几乎可以搜集到所有
WesternBlot
的中英文资料,仅供实验参考,可以根据自己实验的实际情况进行调整。 这里提供一种:1)按厂商的使用指南用两块干净的玻璃,平板和0.75mm垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层,并固定在灌胶支架上。2)按表7.1配制分离胶液体并脱气,然后加入10%的过硫酸铵和TEMED,...
western blot
的工作原理
答:
蛋白质分子内的二硫键被打开而不被氧化,蛋白质也完全变性和解聚,并形成榛状结构,稳定的存在于均一的溶液中,SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷,平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子,这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖,远远超过其原来所带的电荷,从而使蛋白质原来所带的...
wb没加marker怎么补救
答:
wb没加marker补救不了。因为不同胶、电泳的时间、缓冲液、
上样
量等因素,每次上样时,这些因素都不能保证完全一致,而marker是对照,如果目的条带与marker不同时进行电泳,那么结果肯定无法进行目的条带大小的判断,所以这种情况下只能重新点样。在
westernBlot
过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是个...
westernblot
最后一步没出结果,片子很干净,如果在确定一抗没问题的前提...
答:
没有问题的。我这样做过,电泳没问题的话能够显出条带的,但整体亮度要弱些。如果一抗没问题的话建议下次可以加个阳性蛋白做对照,看看哪里出问题了 祝实验顺利!
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