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为什么要预热电泳胶
SDS-PAGE样品上样前
为什么要
加热
答:
蛋白质
电泳
前,需用样品缓冲液处理,样品缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将蛋白质分子中的S-S(二硫键)还原.电泳样品制备时加热,就是为了加速这些组分与蛋白质的反应.
做聚丙烯酰胺
电泳
时,胶凝的时间对实验有没有影响呀,太快会怎么样,还有...
答:
胶凝得太快会导致不均匀,调带不整齐
。也容易凝在烧杯里。对于测序胶,
预电泳可以去除凝胶的杂质离子,同时使凝胶板达到所需的温度
。高温电泳可防止GC丰富区形成的发夹状结构,影响测序的结果。
电泳为什么
是要将样品煮沸5分钟
答:
SDS-PAGE
电泳
你做的是变性电泳,也就是加SDS,并
需要
沸煮的. 在沸煮过程中,蛋白样品必然变性由原来的球状变成线性,但是形成的时候蛋白质-SDS复合物,所以不会沉淀.这种复合物在凝胶中迁移率只跟蛋白质分子量大小有关,所以能进行蛋白的分离鉴定. Marker一般都是预变性的也就是预煮过的,所以可以不用再...
为什么
样品在
电泳
前进行高温处理
答:
电泳
样品加入样品处理液后,经过高温处理,其目的是将SDS 与蛋白质 充分结合,以使蛋白质完全变性和解聚,并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷;另外 样品处理液中通常还加入溴酚蓝染料, 用于监控整个电泳过程; 另外样品处理液中还加入适 量的蔗糖或甘油以增大溶液密度, 使加样时样品溶液可以快速...
聚丙烯酰胺凝
胶电泳
中
为什么要
煮沸
答:
样品煮沸主要是为了破坏蛋白结构,因为影响
电泳
的不仅仅是分子量,结构也影响,煮沸就是为了破坏蛋白的空间结构对电泳的影响,仅按分子量分出条带
电泳
加样
为什么要
煮沸
答:
通过加热,促进蛋白形成椭圆结构,椭圆的短轴一致,长轴依据蛋白的分子量而不同,在
电泳
中表现为不同的泳动速率,与蛋白标准对照,从而达到测定分子量的目的。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠 (...
跑page
胶要预电泳
吗
答:
要。跑page胶预电泳可以消除凝胶上的任何剩余离子,平衡凝胶的电性质,并确保凝
胶电泳
过程的稳定性和一致性,对结果的质量有决定性的影响,是要进行的。预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂。
蛋白质分子量测定过程中,样品上样前
为什么要
进行沸水处理
答:
高效凝胶过滤色谱,电喷,雾离子化质谱法等,大部分都不
需要
煮沸!!如果你只是简单的使用SDS聚丙烯酰胺凝
胶电泳
的方法,那么煮沸的作用一个是使得蛋白质形成单亚基,另一个是与SDS充分结合,形成性状规则的长棒状结构。但是实际上聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种是非变性电泳,是不需要煮沸的!请酌情考虑 ...
做琼脂糖凝
胶电泳
时,
为什么
琼脂糖要煮沸3次?
答:
去除溶解其中的气体,出现气泡会干扰洗脱顺序.(至于
为何
三次,不知)
聚丙烯酰胺凝
胶电泳
预电泳相关问题
答:
预
电泳
是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂,提高分辨率,电泳30-60分钟后上样
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