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为什么要预热电泳胶
为什么
SDS-PAGE
电泳
时样品液再加样前要在沸水中加热?
答:
使样品充分变性,伸展,与SDS充分结合,成为雪茄状,这样分子量才能用marker计算,因为marker都是充分变性的。溴酚蓝在
胶
中的
电泳
速度较快,相当于一个很小的蛋白分子,标记你的样品在胶中的电泳距离。蛋白质电泳前,需用样品缓冲液处理,样品缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将蛋白质分子...
SDS-PAGE样品上样前
为什么要
加热?
答:
蛋白质
电泳
前,需用样品缓冲液处理,样品缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将蛋白质分子中的S-S(二硫键)还原。电泳样品制备时加热,就是为了加速这些组分与蛋白质的反应。问一下你们试验提取的是不是总蛋白?还是特定的一种蛋白?我想应该是提的总蛋白,那么就应该做到:尽量提取完全;...
...凝
胶电泳
分离血清蛋白质的实验中,当分离胶加完之后
为什么需要
...
答:
浓缩在一起。样品液煮沸这个问题我个人认为是可以商榷的,因为理论上煮沸可以使SDS和蛋白更快更好的结合,以便于SDS-PAGE的进行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上样结果更好。对于非还原Loading buffer(即不含巯基乙醇)的样品,一般是不要煮沸的。长时间的
电泳
会使正极变酸,负极变碱。
...凝
胶电泳
分离血清蛋白质的实验中,当分离胶加完之后
为什么需要
...
答:
\x0d\x0a\x0d\x0a样品液煮沸这个问题我个人认为是可以商榷的,因为理论上煮沸可以使SDS和蛋白更快更好的结合,以便于SDS-PAGE的进行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上样结果更好。对于非还原Loading buffer(即不含巯基乙醇)的样品,一般是不要煮沸的。\x0d\x0a\x0d\x0a长时间的
电泳
会使...
为什么要
用凝
胶电泳
来分离DNA
答:
1、了解目的条带是多大,mark的条带是多大,看基因大小是否符合。2、目的条带是否清晰,有无拖尾等现象,mark跑的是否清晰,能否表征条带的大小。根据
电泳
中是否使用支持介质分为自由电泳和区带电泳。自由电泳不使用支持介质,电泳在溶液中进行。这类电泳又分为非自由界面电泳和自由界面电泳两类。非自由...
为什么胶
体在加热的时候会沉淀?
答:
加热胶体,能量升高,胶体运动剧烈,碰撞次数增加,使胶核对离子吸附力减弱,减弱胶体稳定性因素导致聚沉,比如制作氢氧化铁胶体是不能长时间加热,否则生成的不是氢氧化铁胶体,而是氢氧化铁。胶体的聚沉是中和胶体粒子所带的电荷,使胶体粒子聚集长大,形成颗粒较大的沉淀从分散剂里析出的过程。加热、加电解质...
什么
是
电泳
?其影响因素有哪些? SDS-PAGE技术有何特点和用途?
答:
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。浓缩
胶
的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳
开始后,HCL解离成氯...
什么
叫
电泳
,电泳主要用来做什么?
答:
带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为
电泳
(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早发现。1936年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪 ...
sds-page凝
胶电泳
原理是
什么
?
答:
sds-page凝
胶电泳
原理是根据检体中蛋白质分子量大小的不同,使其在
电泳胶
中分离。SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂...
琼脂糖凝
胶电泳
的原理
什么
答:
琼脂糖凝
胶电泳
的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于...
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