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    • 电泳为什么是要将样品煮沸5分钟

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    推荐答案   2017-03-17
    SDS-PAGE电泳你做的是变性电泳,也就是加SDS,并需要沸煮的. 在沸煮过程中,蛋白样品必然变性由原来的球状变成线性,但是形成的时候蛋白质-SDS复合物,所以不会沉淀.这种复合物在凝胶中迁移率只跟蛋白质分子量大小有关,所以能进行蛋白的分离鉴定. Marker一般都是预变性的也就是预煮过的,所以可以不用再煮了.
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    在SDS-PAGE电泳前,蛋白质样品应该如何处理答：这个是看你的目的了，如果你要跑还原性电泳，那么样品需要用含有β-巯基乙醇的loading buffer沸煮5分钟，这样使蛋白间的二硫键在还原剂β-巯基乙醇的作用下被打开，得到的是蛋白的一级结构。而非还原的电泳就是在loading buffer中不加入还原剂β-巯基乙醇，这样的电泳比较能够真实的反应蛋白当时的情况，...
    电泳加样为什么要煮沸答：因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。加热会使蛋白质变性，肯定会改变复合物的性质，只要不是改变分子量/表观分子量，就不会影响结果。
    蛋白质电泳,样品上样前为什么要沸水浴答：才能完全按照分子量跑电泳,加的蛋白Marker才有指示分子量的意义!二硫苏糖醇或巯基乙醇可以破坏二硫键,煮加速蛋白质的变性,SDS的存在可以使每个氨基酸带相同的电荷,使整个蛋白呈线性结构.100度煮10min后13000,离心5分钟,取上清电泳,因为沉淀会导致拖尾.也可以取上清到另一管,4度可以放一周备再次电泳.
    为什么SDS-PAGE电泳时样品液再加样前要在沸水中加热?答：使样品充分变性，伸展，与SDS充分结合，成为雪茄状，这样分子量才能用marker计算，因为marker都是充分变性的。溴酚蓝在胶中的电泳速度较快，相当于一个很小的蛋白分子，标记你的样品在胶中的电泳距离。蛋白质电泳前，需用样品缓冲液处理，样品缓冲液中除SDS外，还有还原剂β-巯基乙醇，它可将蛋白质分子...
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