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蛋白质分子量测定过程中,样品上样前为什么要进行沸水处理
如题所述
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推荐答案 2011-06-17
你是用什么方法测定蛋白质分子量?
测定蛋白质分子量的方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳,高效凝胶过滤色谱,电喷,雾离子化
质谱法
等,大部分都不需要煮沸!!
如果你只是简单的使用
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
的方法,那么煮沸的作用一个是使得蛋白质形成单
亚基
,另一个是与SDS充分结合,形成性状规则的长棒状结构。
但是实际上聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种是非变性电泳,是不需要煮沸的!
请酌情考虑
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其他回答
第1个回答 2011-06-17
变性,这样才能与SDS充分结合。否则测定不准。
相似回答
电泳加样
为什么要
煮沸
答:
加热是SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量的必须步骤
。通过加热,促进蛋白形成椭圆结构,椭圆的短轴一致,长轴依据蛋白的分子量而不同,在电泳中表现为不同的泳动速率,与蛋白标准对照,从而达到测定分子量的目的。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。如果在...
...PAGE电泳
,为什么蛋白样品
要煮沸
处理
?煮沸离心后我的蛋白是不是会被...
答:
在沸煮过程中,蛋白样品必然变性由原来的球状变成线性,但是形成的时候蛋白质-SDS复合物,所以不会沉淀
。这种复合物在凝胶中迁移率只跟蛋白质分子量大小有关,所以能进行蛋白的分离鉴定。Marker一般都是预变性的也就是预煮过的,所以可以不用再煮了。
在sds-page中
样品为什么要
在
沸水
中煮几分钟
答:
通过加热和SDS可以使蛋白质变性,多亚基的蛋白质也将解离为单亚基
。同时还原剂可以切断蛋白质中的任何一个二硫键(使二硫键还原)。经过这样处理的样品中的肽链都是处于无二硫键连接的,分离的状态。参考资料:http://hi.baidu.com/xujunguo/blog/item/db25bf16345ccb4221a4e902.html ...
SDS-PAGE
样品上样前为什么要
加热?
答:
蛋白质电泳前,需用样品缓冲液
处理,样品
缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将
蛋白质分子中
的S-S(二硫键)还原。电泳样品制备时加热,就是为了加速这些组分与蛋白质的反应。问一下你们试验提取的是不是总蛋白?还是特定的一种蛋白?我想应该是提的总蛋白,那么就应该做到:尽量提取完全;应使所有蛋白全部处于溶...
为什么
SDS-PAGE电泳时
样品
液再加
样前要
在
沸水
中加热?
答:
使样品充分变性,伸展,与SDS充分结合,成为雪茄状,这样
分子量
才能用marker计算,因为marker都是充分变性的。溴酚蓝在胶中的电泳速度较快,相当于一个很小的
蛋白分子
,标记你的样品在胶中的电泳距离。蛋白质电泳前,需用样品缓冲液
处理,样品
缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将
蛋白质分子
...
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