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聚丙烯酰胺凝胶电泳中为什么要煮沸
如题所述
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推荐答案 2012-05-15
样品煮沸主要是为了破坏蛋白结构,因为影响电泳的不仅仅是分子量,结构也影响,煮沸就是为了破坏蛋白的空间结构对电泳的影响,仅按分子量分出条带
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电泳
前蛋白
煮沸
重复实验
时
还
需要煮
吗
答:
蛋白煮沸变性之后是不能再复性的了,所以煮沸一次之后想重复实验的话不需要煮沸了
。蛋白电泳一般指聚丙烯酰胺凝胶电泳,它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋...
为什么
SDS-PAGE
电泳时
样品液再加样前要在沸水中加热?
答:
使样品充分变性,伸展,与SDS充分结合,成为雪茄状,这样分子量才能用marker计算,因为marker都是充分变性的。溴酚蓝在胶中的
电泳
速度较快,相当于一个很小的蛋白分子,标记你的样品在胶中的电泳距离。蛋白质电泳前,需用样品缓冲液处理,样品缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将蛋白质分子...
蛋白质分子量测定过程中,样品上样前
为什么要
进行沸水处理
答:
高效凝胶过滤色谱,电喷,雾离子化质谱法等,大部分都不
需要煮沸
!!如果你只是简单的使用SDS
聚丙烯酰胺凝胶电泳
的方法,那么煮沸的作用一个是使得蛋白质形成单亚基,另一个是与SDS充分结合,形成性状规则的长棒状结构。但是实际上聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种是非变性电泳,是不需要煮沸的!请酌情考虑 ...
电泳为什么
是要将样品
煮沸
5分钟
答:
SDS-PAGE
电泳
你做的是变性电泳,也就是加SDS,并需要沸煮的. 在沸煮过程中,蛋白样品必然变性由原来的球状变成线性,但是形成的时候蛋白质-SDS复合物,所以不会沉淀.这种复合物在
凝胶中
迁移率只跟蛋白质分子量大小有关,所以能进行蛋白的分离鉴定. Marker一般都是预变性的也就是预煮过的,所以可以不用再...
SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳
分离血清蛋白质的实验中,当分离胶加完之后
为什
...
答:
因为理论上煮沸可以使SDS和蛋白更快更好的结合,以便于SDS-PAGE的进行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上样结果更好。对于非还原Loading buffer(即不含巯基乙醇)的样品,一般是不
要煮沸
的。\x0d\x0a\x0d\x0a长时间的
电泳
会使正极变酸,负极变碱。
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