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如何稀释实时荧光定量PCR的引物
如题所述
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推荐答案 2016-12-21
用已知浓度的DNA样本(通常是质粒)梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候,这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。
标准品的荧光强度和已知的浓度作图,可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后,就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
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如何稀释实时荧光定量PCR的引物
?
答:
对任意
PCR引物
,正确加水体积应为V(ul)=N (nmol)*10,即浓度为100uM. ie,9.96*10= 99.6ul 注:一般情况下,所有PCR引物的stock concentration都是100uM. 使用时将其
稀释
十倍为10uM进行PCR反应。另:拿到PCR引物后,应先13.2k rpm离心一分钟,加入65摄氏度预热ddH2O配置成100umol溶液,再65摄...
请教 关于
荧光实时定量PCR
答:
一般用的是灭菌的双蒸水 保证引物的终浓度就可以
。都是用水稀释的,没啥差别
PCR
怎样稀释
做50微升体系的PCR使用
的引物
浓度是多少?怎样稀释?
答:
博凌科为-为你浓度一般是10uM吧.50ul体系一般加引物1uL.合成引物的管上会标注每管引物的mol数,
按引物干粉的量加上相应的双蒸水就可以了
.
怎么
使用
荧光定量pcr
2
答:
1
样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解
。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被...
PCR荧光定量
答:
可以考虑提高退火温度及降低
引物
浓度。调整好之后,质粒用
PCR
水做10倍梯度
稀释
(比如4微升稀释至40微升),如果扩增效率没问题的话,理论上质粒浓度每差10倍,其ct值就相差3.3。另外,如果体系调整好之后,你的质粒最小的还是在26以上的话,最低只能稀释到100倍了,再低就做不出来了 ...
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