55问答网
所有问题
当前搜索:
荧光定量的引物一般是多长
实时
荧光定量
PCR中两种
引物
的设计有什么要求
答:
1、引物长度一般为15-30bp
,常用的为18-27bp 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3’的下降形状也有利于引物与模板的结合;4、ΔG值(...
实时
荧光定量
PCR中两种
引物
的设计有什么要求
答:
12.做荧光定量产物长度80-150bp最好,最长是300bp.13.引物设计避免DNA污染
,最好跨外显子接头区。14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70%或者有8个互补碱基同源。15.查看有无假基因的存在。假基因就是无功能的DNA序列,与需要扩增的目的片段长度相似。16.TM值在55-63度之间。17. .引物与...
实时
荧光定量
PCR中两种
引物
的设计有什么要求
答:
引物长度,
20bp
;Tm值可以设置在55度(实验的时候可以用60度退火,两条引物的退火温度不要相差大于2度);产物长度,100-150bp(如果没有合适的引物,产物长度可以设置在80-200)。如需设计引物,可以微信搜索“为青生物”,由专业人员提供免费的荧光定量PCR引物设计服务。
荧光定量引物
利用的目的序列是全长还是部分
答:
部分,
长度在250bp左右
,不能太长,不然扩增效率会影响实验结果。
我要做
荧光定量
RT-PCR,产物长度是73bp,可以吗?
答:
可以的,
50bp到150bp都可以
,只要你设计的引物探针特异性好,是可以做出来的;不过一般都是100bp-150bp左右比较好,我研究过中山达安公司09年的H1N1检测试剂盒,通过TA克隆得知,他们的检测H1N1病毒的H1跟N1两管混合液中扩增目的片段的长度都是70bp左右。如果你的引物探针以及合成好的了话,就做实验吧...
半
定量
RT-PCR设计
引物
时产物长度为多少合适
答:
荧光定量一般
限定在100-250bp间,半定量似乎没有太严格的限制,可以放宽到500-600bp吧,再长些应该也问题不大,可能对逆转录要求更高些
荧光定量
PCR
引物
为什么要跨内含子设计?
答:
荧光定量
PCR的扩增区段比较小,也就200bp左右,而且
一般
以cDNA为模板。如果不注意
引物
设计的话,很可能落在同一个外显子内。此时,无论cDNA还是基因组DNA都会给出同样的信号,也就是说定量会出现误差。如果引物跨内含子,则cDNA会给出信号,而基因组DNA由于引物无法完全配对而没有信号,也就避免了基因...
荧光探针
的引物
和
荧光定量的
一样吗
答:
实时
定量的引物
设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了
荧光定量
PCR
的引物
怎么设计
答:
2、扩增片段大小最好在200bp左右,太大会影响扩增效率;3、最好一次分别设计两条上游(距离较近)和下游引物(距离较近),组合成4个扩增片段;4、用任何方法或软件设计好的引用都要用少量cDNA样本来验证引物扩增效果:主要是有无二聚体?有无非特异性扩增?5、筛选出一对最满意
的引物
上机,祝你实验...
做qpcr的mrna长度
答:
做qpcr的mrna长度约为100nt左右。实时
荧光定量
PCR(qPCR),是利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,从而对起始模板进行定量及定性分析的一项技术。qPCR
引物
的好坏会直接影响到实验结果,所以引物设计是整个实验中非常关键的一步。nt是指核酸分子,不同的mRNA长度不同,包括的...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
荧光定量PCR引物设计原则
荧光定量模板加多少
荧光定量引物纯化方式
荧光定量引物设计原则tm值
荧光定量引物设计温度
荧光定量pcr退火温度一般是多大
荧光定量PCR引物设计
荧光定量片段一般是多大
如何设计带荧光的PCR引物