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实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求
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推荐答案 2017-07-10
实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了
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实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求
答:
7.引物之间不能有连续4个碱基的互补
。8.引物5′端可以修饰。9. 3’端不要以A结尾,3′端不可修饰,而且要避开AT,GC rich的区域,避开T/C,A/G连续结构(2-3个)。10.
引物3′端要避开密码子的第3位
。11.引物整体设计自由能分布5‘端大于3’端,且3‘端自由能最好小于9KJ/mol。可用olig...
实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求
答:
引物长度,20bp;Tm值可以设置在55度(实验的时候可以用60度退火,两条引物的退火温度不要相差大于2度)
;产物长度,100-150bp(如果没有合适的引物,产物长度可以设置在80-200)。如需设计引物,可以微信搜索“为青生物”,由专业人员提供免费的荧光定量PCR引物设计服务。
在
pcr
实验中,
引物的设计
一般
有哪些要求
答:
引物设计原则:长度: 18~30 bp, 20 bp左右最为常用
。引物过短易导致非特异性打增;较长引物特异性强,但退火效率低,且易形成二级结构,从而导致PCR产量少。二级结构:引物二聚体及发夹结构的能值过高(大于4.5 kcal/mol )易导致产生引物二聚体带,并且降低有效引物浓度,使PCR反应不能正常进...
pcr
反应
中引物的
作用是什么?
有什么要求
?
答:
人工合成的两段寡核苷酸序列,
一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补
。PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准(常以信息链为基准),5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′...
PCR引物有什么要求
呢?
答:
2、
引物
序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GGG或CCC,也会使错误引发机率增加。3、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率,末位碱基为A的...
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