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荧光定量pcr引物
请教 做染料法
荧光定量PCR
,熔解曲线分析,如何区分目的基因产物和
引物
...
答:
你要重新设计
引物
了 有引物2具体有好几个峰,谁也不知道是哪个,是产物的话主要看溶解温度,溶解温度高一般是产物。建议重新设计引物,重做梯度PRC 电泳分析。
荧光定量PCR
步骤
答:
如果lz确实已经确定该基因SNP位点以及突变型,你可以选择
荧光定量PCR
进行检测,检测方法是:1、探针设计在突变位置,有几个突变点设计几个(不同突变型需要不同的荧光标记:例如,野生型探针用FAM、其中一个突变点探针用VIC或者HEX、另外的一个突变探针用TET等等);2、然后在突变点两端设计
引物
(大概100...
我要做
荧光定量PCR
SYBR Green I 染料法,国外有文献检测相同的细胞因子...
答:
文献中的基因和你的目标基因序列相同,你可以用文献中的
引物
。否则要重新设计。
做
荧光定量PCR
和半定量PCR有什么区别?半定量的PCR退火温度和荧光定量...
答:
但是如果要发表比较高档次的论文的话,某些变态的老外审稿并不认可单一的
荧光定量PCR
的结果,他们会同时需要作者做一个半定量RT-PCR来作为辅助证明。半定量RT-PCR的
引物
和荧光定量PCR的引物设计原则并不是一样的,换而言之,二者的引物并不是可以通用的。所以退火温度自然是不同的,具体怎么不同,要根据...
实时
荧光定量PCR
扩增效率低怎么办
答:
引物
和探针设计不当 为了最高效地设计用于实时
荧光定量PCR
的引物和探针,我们强烈建议您使用引物设计软件。大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针。这些参数涉及了引物/探针的Tm值、互补性、二级结构以及扩增子大小等重要因素。另外还建议您限制连续的重复核酸数目。当设计用于真核目标...
反转录PCR和
荧光定量PCR
答:
一个是RT-pcr,reverse transcription pcr的简写 一个是real-time,一般不会简化为“rt-pcr”,又称实时
定量pcr
,Q-pcr,应该就是你说得
荧光定量
而你要测mRNA的量,就是先反转录成cDNA,再作定量pcr,就是前两者的合,常称为qRT-PCR 有很多real-time的试剂盒,你可以网上看下说明书 ...
实时
荧光定量pcr
内参是什么东西
答:
实时
荧光定量pcr
内参是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
,第一次做
荧光定量PCR
,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲 ...
答:
朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通
PCR
对Realtime PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的
引物
跟普通PCR的引物有很大差别,realtime PCR的引物因为要顾及试验体系的要求,所以在引物性能方面有一些牺牲,比如有时候要求180-200bp的扩增需要会牺牲一些性能,比如存在二聚体之类...
荧光定量PCR
与普通PCR相比有哪些不同?.生意经求助
答:
可能我这对
引物
把其它序列扩增出来了,而且扩增效率很高(我一个同学设计了十几对才找到一对好用的)。记住primer5.0设计出来的100%好的引物,到了
定量PCR
上不一定好使,这是我最大的经验。
定量pCR
的引物对匹配度要求不高,我现在使用的引物就有几个碱基不匹配,但实验结果很好。有一个办法可以帮助...
荧光定量pcr
有非特异性扩增怎么解决
答:
你看纵坐标的数值都非常的校所以不是真正的扩增信号,都是背景噪音干扰而已。没有任何扩增产物。实时
PCR
产物的Tm值大小一般会在80deg;上下,所以溶解曲线不必从40deg;开始,可以从65deg;开始进行溶解曲线绘制,另外在产物之前出现的小峰,同时也在阴性对照中出现了,应该是
引物
二聚体或者是非特异的扩增。
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