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荧光定量pcr引物
荧光定量PCR
用10ul反应成吗
答:
可能我这对
引物
把其它序列扩增出来了,而且扩增效率很高(我一个同学设计了十几对才找到一对好用的)。记住primer5.0设计出来的100%好的引物,到了
定量PCR
上不一定好使,这是我最大的经验。
定量pCR
的引物对匹配度要求不高,我现在使用的引物就有几个碱基不匹配,但实验结果很好。有一个办法可以帮助...
荧光定量PCR
中扩增曲线能说明什么问题
答:
检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行realtime
pcr
反应。pcr产物与 dna ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,goldview染色,检测pcr产物是否为单一特异性扩增条带。原理:pcr扩增时在加入一对
引物
的同时加入一个特异性的
荧光
探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针...
关于
定量PCR荧光
信号强度
答:
所谓定量PCR技术(real-time PCR)指 PCR反应体系 加入荧光基团 利用荧光信号累积实 监测整 PCR进程 通 特定数 原理 未知模板进行定量 析 2、
荧光定量PCR
与普通PCR 主要区别 理论 PCR 指数增 程 实际 PCR扩增曲线并 标准 指数曲线 S形曲线 随着PCR循环 增 扩增规模迅速增 Taq酶、dNTP、
引物
甚至DNA...
荧光定量pcr
的检测下限是多少
答:
pcr荧光定量
检测下限25拷贝。在另外回的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和
PCR荧光
Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的...
primer blast验证
引物
结果分析方法是什么?
答:
2、预测出来的产物大小。第三部分正反向
引物
和模板的结合形式,“点”代表该位置的序列和模板完全互补配对。primer blast验证引物结果:对于常规PCR,产物可以通过凝胶电泳对非特异性条带进行分离,引物的非特异性并不是很重要,但是对于SYBR Green染料法
荧光定量PCR
,引物的特异性则非常重要。但是,并不是...
如何作QPCR的标准曲线
答:
作QPCR的标准曲线可以用
PCR
-ELISA法作。具体如下:PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素等标记
引物
,扩增产物被固相板上特异的探针所结合;再加入抗地高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,加入内标,作出标准曲线,也可实现
定量
检测目的。通过测定...
第一次做
荧光定量PCR
,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是...
答:
问题有可能如下:1) 模板制备有问题。你可以用普通
PCR
扩增,然后电泳确定是不是模板有问题?2)
引物
问题:引物设计的好与否,对Realtime 结果至关重要! 可以用普通PCR确定你的引物扩增效率如何? 模板可以选取一个阳性质粒当模板。3) Realtime 体系配置出问题:好好想一下,该加的东西都加了没?
定量PCR
可以扩增长片段吗
答:
可能我这对
引物
把其它序列扩增出来了,而且扩增效率很高(我一个同学设计了十几对才找到一对好用的)。记住primer5.0设计出来的100%好的引物,到了
定量PCR
上不一定好使,这是我最大的经验。
定量pCR
的引物对匹配度要求不高,我现在使用的引物就有几个碱基不匹配,但实验结果很好。有一个办法可以帮助...
荧光定量PCR
能不能代替普通PCR? 做普通PCR实验?
答:
荧光
实时
定量PCR
的方法更精确代替一般的pcr实验还是没问题的
做
荧光定量PCR
,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗...
答:
2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有RNA酶污染,所以这个比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是提取操作或者试剂问题导致蛋白质残留过多。从个人经验来看,做普通跑胶比值要求高一些在1.80-2.20之间;如果做实时
定量
要求就会低很多,1.5我都做过,影响不是很大,总量少...
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