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荧光定量pcr引物
普通pcr引物设计和
荧光定量pcr引物
设计的区别
答:
一、方法不同 1、普通pcr引物设计:引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、
荧光定量pcr引物
设计:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记跟踪PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度 二、原理不同 1、普通pcr引物设计:为了找到一对合适的...
实时
荧光定量PCR
的
引物
能不能用来做RT
答:
实时
荧光定量PCR
的引物能不能用来做RT 参照以下real-time
PCR引物
设计原则:1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment软件看看结果.2.产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol).3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大.4.G+C含量在40%~60%之间,45-...
实时
荧光定量pcr引物
怎么设计
答:
1、查找该物种或近缘物种信息,看是否能确定内含子序列的位置,在CDS上设计跨内含子的
引物
,以避免基因组污染;2、扩增片段大小最好在200bp左右,太大会影响扩增效率;3、最好一次分别设计两条上游(距离较近)和下游引物(距离较近),组合成4个扩增片段;4、用任何方法或软件设计好的引用都要用少量...
为什么
荧光定量pcr
可以准确定量
答:
为什么
荧光定量pcr
可以准确定量 实时定量的
引物
设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了 用已知浓度的DNA...
荧光定量pcr
原理
答:
荧光定量pcr
原理是:在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR扩增时在加入一对
引物
的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。开始时,探针完整地结合在DNA任意...
做实时
定量PCR
时,如果有
引物
二聚体,对实验结果有什么影响吗
答:
荧光定量PCR
是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。|||原理不同:
荧光定量pcr
实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外...
实时
荧光定量PCR
的原理
答:
就有一个
荧光
分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。服务流程1.客户认真写好订单,提供待检基因相关信息;2.签订技术服务合同,支付预付款(30-50%);3.设计合成
定量PCR引物
(或客户提供文献引物委托本公司合成);4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录;5.PCR预实验,主要检测引物的...
普通RT-PCR与实时
荧光定量PCR
的
引物
有什么区别
答:
实时
定量
的
引物
设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了 ...
实时
荧光定量PCR
的结果该怎样分析?
答:
1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算;2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算;3、
引物
或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性;4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起;5、看CT值是分析
荧光定量PCR
最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价值了,平时...
荧光PCR
技术如何操作?
答:
反转录所得cDNA的量必须精确地等于相应的mRNA的量,反转录对于实时
定量PCR
来说是非常关键的一步。目前常用的反转录酶有2种:AMV-RT和MMLV-R。反转录常用的
引物
有随机引物、Oligo-dT和特异引物。相比之下Oligo-dT和特异性引物更适合实时定量PCR。5.利用实时定量PCR研究基因表达时,一般用相对定量的方法...
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