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sds page浓缩胶和分离胶
为什么
SDS- PAGE
电泳中
浓缩胶
的pH值比
分离胶
高?
答:
在
SDS-PAGE
中,
分离胶和浓缩胶
中tris-Hcl的pH值不同,主要是因为它们的作用和配方不同。分离胶的主要作用是分离蛋白质,它的配方中含有更高浓度的Tris-Hcl,pH范围在8.9左右。这种高pH环境有助于使蛋白质更好地分离,因为蛋白质的带电性会随着pH值的升高而改变,使它们更容易在电场中移动。同时,...
SDS-PAGE
为什么要制两片胶
答:
浓缩胶
,孔径比较大,所有蛋白都能很快穿过,保证所有蛋白分子在同一起跑线上(浓度胶
和分离胶
的界限);分离胶可按分子量的大小分开不同蛋白质
SDS-PAGE
电泳中,
分离胶和浓缩胶
的配方是不是只有Tris-Cl的PH不同_百度...
答:
在
SDS
-
PAGE
不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,
浓缩胶
是pH6.7,
分离胶
pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动.由...
SDS-PAGE
中上层胶为什么用pH6.8下层胶用pH8.8?
答:
上层的
浓缩胶
用的是Tris-HCL缓冲液,PH6.8,HCL的解离度大,几乎全部成CL-,CL-在电场中移动最快。而电泳槽中含有甘氨酸,在PH6.8时只有少量解离,在电场中移动的最慢。蛋白质(被夹在中间)就在由快慢离子形成的电位梯度中被浓缩了。下层的
分离胶
用的是Tris-甘氨酸缓冲液,PH8.8,在此PH下,...
浓缩胶和分离胶
分别发挥的作用。
答:
1、
浓缩胶
的作用:有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带,在电泳的时候可以看到样品被压成一条线。2、
分离胶
的作用:有分离分子的作用,为电荷效用和分子筛效用。当样品从浓缩胶进入分离胶时,由于蛋白的分子量不一样,...
求
SDS-PAGE
配方
分离胶
7.5%
浓缩胶
4%
答:
5ml 7.5%
分离胶
:H2O 2.35ml 30%丙烯酰胺溶液 1.25ml 1.5M Tris(pH8.8) 1.3ml 10%
SDS
50ul 10%APS 50ul TEMED 4ul 5ml 4%
浓缩胶
:H2O 3ml 30%丙烯酰胺溶液 670ul 0.5M Tris(pH6.8) 1.25ml 10%SDS 50ul 10%APS 50ul TEMED 4ul ...
分离胶和浓缩胶
的区别是什么
答:
一、性质不同 1、
浓缩胶
:在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。2、
分离胶
:不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分,其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。二、过程不同 1、浓缩胶过程:由于...
最近做WB,发现
SDS-PAGE
上样后开始电泳不久就看见LOADING BUFFER漏到...
答:
一、可能是玻璃板没有加紧 二、
浓缩胶
没有凝固好,灌胶的问题 三、电压是否大了?我们常用浓缩胶80v,30min.灌胶的问题可能性比较大,祝实验顺利
sds-page
中
浓缩胶和分离胶
各起什么作用
答:
上半部分的胶浓度小,所以蛋白质跑的快,下半部分浓度大,蛋白质跑得慢。所以一到他们的分界线,所有的蛋白质都被个愣一下卡住,走的很慢,所以他们都在一条水平线上重新开始移动。然后分子量小的蛋白质跑的快,大的跑不动。所以根据位置可以推断出蛋白质分子量。(对比加入的标准梯度蛋白质)。不...
在
SDS-PAGE
中
分离胶与浓缩胶
中均含有TEMED和APS,试述其作用?
答:
APS是过硫酸铵,用于产生自由基,自由基引发丙烯酰胺聚合;TEMED是N,N,N',N'-四甲基乙二胺,用于催化APS产生自由基
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