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g250测蛋白浓度标准曲线
考马斯亮兰
测定蛋白
质的方法步骤
答:
(一)
标准曲线
制备:配制lmg/ml的
标准蛋白
溶液。制备系列稀释液,其
浓度
分别为1000μg/ml,500μg/ml,
250
μg/ml,125μg/ml ,62.5μg/ml和31.25μg/ml。按下表操作:摇匀,室温静置3分钟。在第一管为对照管,在721型分光光度计于波长595nm处比色-读取光密度。以各管光密度为纵...
考马斯亮兰
测定蛋白
质的方法步骤
答:
()
标准曲线
制备:配制lmg/ml
标准蛋白
溶液制备系列稀释液其
浓度
别1000μg/ml500μg/ml
250
μg/ml125μg/ml 62.5μg/ml31.25μg/ml 按表操作:摇匀室温静置3钟第管照管721型光光度计于波595nm处比色-读取光密度各管光密度纵座标各标准品浓度(μg/ml)作横座标作图标准曲线 (二)未知品
测定
:...
什么是考马斯亮蓝
g
-
250测
?
答:
1.bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝
g
-
250
溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。2.
标准曲线蛋白质
样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如
测定
抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可...
用紫外分光光度计
测蛋白
,是用考马斯亮蓝
G250
吧蛋白染色,我用牛血清白...
答:
肯定是你标曲没做好,可以将标曲的体积做大点,会准点。另外,注意对比稀释的要混匀!
考马氏亮兰
G250
法
测定蛋白
质含量实验中测定
标准曲线
和样品之前,首先需...
答:
先用不含
蛋白质标准
液,只含有等量考马氏亮蓝和蒸馏水的等容溶液调零就好。
bradford法
测蛋白浓度
怎么测?
答:
测定
:另取两支干净的试管(做一重复),加入合适
浓度
的待测样品,使其测定值在
标准曲线
的范围内,测定方法同上,由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。注意事项:1、 如果要求严格,最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收,因为这段时间内颜色是最稳定的。2、 若选择在旋涡混合器上混合,注意...
bradford法
测定蛋白
质含量的原理是什么?应如何克服不利因素对测定的影响...
答:
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝
G250
与蛋白质结合可以显色,用分光光度计在吸光度595nm处读数,通过
标准蛋白
与G250结合显色建立标准曲线,再加待
测蛋白
与G250结合显色后读数代入
标准曲线测定蛋白
质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构,缓冲液组分中有干扰试剂等。双缩脲法和Folin—酚试剂法...
怎样配制 考马斯亮蓝
G250蛋白
染色剂
答:
考马斯亮蓝
G
-
250
的配制:1.称取100 mg考马斯亮蓝G-250,溶于50 mL 90%乙醇中,2.加入85%的磷酸100 mL,3.最后用蒸馏水定容到1 000 mL。此溶液在常温下可放置一个月。
Acr/Bic作用
答:
(二)
蛋白
含量的
测定
(1) 制作
标准曲线
1、 从-20℃取出1mg/ml BSA,室温融化后,备用。2、 取18个1.5ml离心管,3个一组,分别标记为0μ
g
,2.5μg,5.0μg ,10.0μg ,20.0μg ,40.0μg。3、 按下表在各管中加入各种试剂。0μg2.5μg5.0μg10.0μ20.0μg40.0μ1mg/ml BSA-2.5μl5.0μl10.0μ20.0μ...
考马斯亮蓝
G
-
250
法
测定蛋白
质含量的原理是什么?
答:
将蛋白质样品或稀释的BSA与Bradford试剂混合,测量在595nm处的吸收值,在建立由一系列稀释的BSA建立的
标准曲线
的情况下,蛋白质的
浓度
可以根据标准曲线而确定。考马斯亮蓝G-
250
(CoomassiebrilliantblueG-250)
测定蛋白
质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质...
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