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荧光定量的引物一般是多长
实时
荧光定量
PCR的原理
答:
就有一个
荧光
分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。服务流程1.客户认真写好订单,提供待检基因相关信息;2.签订技术服务合同,支付预付款(30-50%);3.设计合成
定量
PCR
引物
(或客户提供文献引物委托本公司合成);4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录;5.PCR预实验,主要检测引物的...
荧光定量
PCR—荧光篇
答:
荧光定量
PCR技术是一种高效且实时的定量分析方法,它通过在PCR反应中加入荧光化学物质,监测PCR过程中的荧光信号变化,实现对目标模板的精确计数。技术上,分为荧光染料法和荧光探针法两种。荧光染料法利用荧光染料SYBR GreenⅠ,染料与DNA双链结合时产生荧光信号,PCR扩增过程中,荧光信号强度随产物增加而增强...
请教,做
荧光定量
PCR,内参和目的基因
的引物
浓度和模板浓度需要一致吗...
答:
需要一致,这样才可以做到
定量
,内参才有参考价值。如果模板和
引物
浓度不一致,那么就相当于不同组的实验,没法比较。
第一次做
荧光定量
PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是...
答:
问题有可能如下:1) 模板制备有问题。你可以用普通PCR扩增,然后电泳确定是不是模板有问题?2) 引物问题:引物设计的好与否,对Realtime 结果至关重要! 可以用普通PCR确定你
的引物
扩增效率如何? 模板可以选取一个阳性质粒当模板。3) Realtime 体系配置出问题:好好想一下,该加的东西都加了没?
设计
定量引物的
参考序列是什么
答:
目的基因的mRNA。1、
定量引物
序列与目标基因的外显子区域相结合,可以通过PCR扩增目标基因的特定片段。2、实时
荧光定量
PCR技术进行定量分析,可以准确地检测和计算起始模板数量。3、设计定量引物序列需要考虑引物的特异性和扩增效率,以确保准确的定量结果。
实时
荧光定量
PCR扩增效率低怎么办
答:
引物和探针设计不当 为了最高效地设计用于实时
荧光定量
PCR
的引物
和探针,我们强烈建议您使用引物设计软件。大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针。这些参数涉及了引物/探针的Tm值、互补性、二级结构以及扩增子大小等重要因素。另外还建议您限制连续的重复核酸数目。当设计用于真核目标...
荧光定量
PCR 标准曲线
答:
采用相对法
定量
要求必须目的基因和内参具有相同的扩增效率,所以需要做efficiency curve如果得到的斜率小于0.1,可以采用相对法,否则,需要重新设计能达到相同扩增效率
的引物
,或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例稀释后做出标准曲线,或者...
怎么看
荧光定量
结果?
答:
根据最终得到的数据不同,定量PCR可以分为相对定量和绝对定量两种。典型的相对定量如比较经过不同方式处理的两个样本中基因表达水平的高低变化,得到的结果是百分比;绝对定量则需要使用标准曲线确定样本中基因的拷贝数或浓度。根据所使用的技术不同,
荧光定量
PCR又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I 荧光染料...
荧光定量
pcr扩增结果怎么表示
答:
用Ct值,或者delta Ct值表示
qPCR
引物
怎么设计
答:
深入了解qPCR的魔力,首先,让我们揭开其神秘面纱。qPCR,作为PCR技术的升级版,它的核心原理是通过
荧光
信号追踪目标片段的扩增,从而
定量
分析基因转录水平。与传统PCR不同,qPCR更偏好于短片段的扩增,以确保高度特异性和准确性。PCR反应,这个基础技术,是DNA聚合酶在体外条件下复制DNA的接力赛。
引物
,作为...
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