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荧光定量的引物一般是多长
荧光定量
PCR的荧光信号强度和什么有关系
答:
2、
荧光定量
PCR与普通PCR的主要区别 理论上PCR是一个指数增长的过程,但是实际的PCR扩增曲线并不是标准的指数曲线,而是S形曲线。这是因为随着PCR循环的增多,扩增规模迅速增大,Taq酶、dNTP、
引物
,甚至DNA模板等各种PCR要素逐渐不敷需求,PCR的效率越来越低,产物增长的速度就逐渐减缓。当所有的Taq酶都...
荧光定量
实验需要什么东西
答:
荧光
标记,,检测器,根据电脑检测荧光强度的大小,判断DNA复制的代数
如何判定
荧光定量
结果的真实性?
答:
如果你说的是
荧光定量
PCR的话:根据最终得到的数据不同,定量PCR可以分为相对定量和绝对定量两种。典型的相对定量如比较经过不同方式处理的两个样本中基因表达水平的高低变化,得到的结果是百分比;绝对定量则需要使用标准曲线确定样本中基因的拷贝数或浓度。根据所使用的技术不同,荧光定量PCR又可以分为...
如何用双通道
荧光定量
PCR检测SNP
答:
第一、你需要确定你的双通道的
荧光定量
PCR仪是否支持你所标记的这两种荧光燃料,就是它们的激发波长是否正好是你的PCR仪的滤光片检测波长;第二、确保你
的引物
之间扩增片断不要太大,最好是控制在200BP以内;第三、Taq酶最好是选择一种耐热性能更好的酶,因为这种反应对酶的质量要求更高一些,至于...
如何验证
引物
的特异性
答:
急切盼望各位高手指点!!OLIGE。6软件就可以验证
引物
的特异性。。如果存在同源性你可以BLAST一下。我不知道你的非目的条带是指什么?如果在100BP一下的应该是引物二聚体。。做普通PCR影响不大。。
荧光定量的
就不能有任何非目的条带。。我建议你提高一下退火温度。。每次提高3-4度随着温度的升高目的...
做
荧光定量
PCR时,它的计算公式是什么?
答:
Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。n为扩增反应的循环次数,X0为初始模板量,Ex为扩增效率,N
为荧光
扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值...
ELISA和
荧光定量
PCR的区别
答:
2.内参又是指什么呢,内参和阳性内参有什么区别呢,是不是即有用对数据进行校正的,还有用于监控反应体系防止假阴性现象的。3.
一般
进行探针法
荧光定量
PCR时是不是最好采用内标来监控反应体系呢,如果不适用的话,对实验有什么影响么?ps:我是做绝对
定量的
。4.如果需要用内标的话,我原来一个师兄建议...
荧光定量
PCR的操作步骤
答:
荧光定量
PCR 实验步骤: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA...
我现在要做
荧光定量
PCR,有3个目的基因,以ACTIN基因作为内参,分析其在...
答:
看你的描述,应该是4个分组,做3个目的基因允许有6个复孔 或者减少复孔量每个目的基因设计2-3个
引物
,因为引物很便宜,选择溶解曲线最好的做。开始做都会出现复孔不稳定的情况,做几次操作熟练了复孔数值稳定之后就可以不用复孔了,直接把组内样本一个个上上去。关于数据分析,实时
荧光定量
PCR仪会...
做
荧光定量
时 扩增曲线和溶解曲线都很好 没有出现二聚体 但是为何目的...
答:
朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对Realtime PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的引物跟普通PCR
的引物有
很大差别,realtime PCR的引物因为要顾及试验体系的要求,所以在引物性能方面有一些牺牲,比如有时候要求180-200bp的扩增需要会牺牲一些性能,比如存在二聚体之类...
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