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制作浓缩胶为什么要加sds
sds
-page的电极缓冲液和分离胶,
浓缩胶
缓冲液里
为什么
也
要加入
一定量的s...
答:
我的理解是在整个电泳体系中都保持一定的SDS浓度,
以保证蛋白质与SDS的充分结合,不然可能影响电泳效果
。
SDS
-聚丙烯酰胺凝胶电泳法中
浓缩胶
的作用是
什么
?
答:
在上样孔里加样的时候样品是有一定的高度的,样品里的蛋白没有站在一条起跑线上。
浓缩胶的作用就是压缩样品中的蛋白质成为一条细线站在同一条起跑线上
,这样影响蛋白迁移速率的因素就只有分子量的大小了,也就更有可比性了。
sds
凝胶中
什么
成分是凝固作用的
答:
sds是阴离子去污剂
,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选tris/hcl缓冲液,电极液...
为什么
western blotting
还要加SDS
,蛋白变性不影响与抗体结合吗?_百度...
答:
1、SDS使得蛋白质变性需要达到20%浓度以上
2、在western blotting中,SDS对样本造成的轻微变性不是结合的特异性不分,也就是说不会影响与抗体的结合。
SDS
凝胶电泳中
浓缩胶
的作用机理不明白
答:
浓缩胶的作用是有堆积作用
,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极...
为什么要
向DNA溶液中
加入SDS
?
答:
EDTA可螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制DNase对DNA的降解作用(DNase作用时
需要
一定的金属离子作辅助因子)。(2)溶液Ⅱ的主要成分为氢氧化钠(NaOH)和
SDS
。DNA在pH5~9的溶液中是稳定的,但当pH>12或pH<3时,就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L,
加入
溶液Ⅱ后,该...
sds
-page中
浓缩胶
和分离胶各起
什么
作用
答:
上半部分的
胶
浓度小,所以蛋白质跑的快,下半部分浓度大,蛋白质跑得慢。所以一到他们的分界线,所有的蛋白质都被个愣一下卡住,走的很慢,所以他们都在一条水平线上重新开始移动。然后分子量小的蛋白质跑的快,大的跑不动。所以根据位置可以推断出蛋白质分子量。(对比
加入
的标准梯度蛋白质)。不...
sds
凝胶中
什么
成分是凝固作用的
答:
与促凝剂及环境密切相关;制胶缓冲液:
浓缩胶
选择pH6.7,分离胶选择pH8.9,选择tris-HCL系统,具体作用后面介绍;TEMED与AP:促凝作用,加速聚丙烯酰胺的凝固;十二烷基硫酸钠(
SDS
):阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠.
在
SDS
-PAGE中,配
胶
时需
加入
TEMED和过硫酸铵,它的作用是
什么
?
答:
从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。过硫酸铵作为氧化剂和漂白剂,被广泛地用于蓄电池工业;它还用作聚合的引发剂、纤维工业的脱浆剂;并可用作金属及半导体材料表面处理剂、印刷线路的刻蚀剂;还广泛用于石油开采的油层压裂,面粉和淀粉加工业、油脂工业, 在照相工业上用来除去海波。
SDS
- PAGE的
浓缩胶
和分离胶的pH是一样的吗?
答:
在
SDS
-PAGE中,分离胶和
浓缩胶
中tris-Hcl的pH值不同,主要是因为它们的作用和配方不同。分离胶的主要作用是分离蛋白质,它的配方中含有更高浓度的Tris-Hcl,pH范围在8.9左右。这种高pH环境有助于使蛋白质更好地分离,因为蛋白质的带电性会随着pH值的升高而改变,使它们更容易在电场中移动。同时,...
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