关于考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线如下：
一、试剂：
1.考马斯亮蓝试剂:
考马斯亮蓝G一250100mg溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%H;PO4，加蒸馏水稀释至 1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G-250.4.7%(W/V)乙醇，8.5%(W/V)HPO4。
2.标准蛋白质溶液:
纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
二、器材:
722S型分光光度计使用及原理，移液管使用
三、标准曲线制作:
1.以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20ug、40ug、50ug、60ug)，在坐标轴上绘制标准曲线。
2.利用标准曲线查出回归方程。
3.用公式计算回归方程。
4.或用origin作图，测出回归线性方程。即A595m-aXX()+6一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
5.绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
四、蛋白质含量的测定：
样品即所测蛋白质含量样品(含量应处理在所测范围内)，依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm’然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595m值在0.1-0.05之间，所以上述样品如果A595m值太大，可以稀释后再测As95mm值，然后再计算。
五、注意事项:
1.玻璃仪器要洗涤干净。
2.取量要准确。
3.玻璃仪器要干燥，避免温度变化。
4.对照:用被测物质以外的物质作空白对照。
关于考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线如下：
一、标准曲线
一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
二、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作。
1、考马斯亮蓝试剂:
考马斯亮蓝G—250100mg溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%H,PO4，加蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—250,4.7%(W/V）乙醇，8.5% (W/V)H,PO4o
2、标准蛋白质溶液:
纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCI配制成100ug/ml蛋白溶液。
3、标准曲线制作
（1)、利用标准曲线查出回归方程。
（2)、用公式计算回归方程。
（3)、或用origin作图，测出回归线性方程。即As95nm—a×X()+6一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
（4)、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
三、蛋白质含量的测定:
样品即所测蛋白质含量样品，依照操作步骤1操作，测出样品的Aso5nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。一般被测样品的Asosnm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果As95nm值太大，可以稀释后再测As95nm值，然后再计算。
四、操作流程：
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1、Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2、标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3、将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4、按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5、每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min。
6、根据标准曲线计算待测样本的浓度。
五、注意事项:
1、玻璃仪器要洗涤干净。
2、取量要准确。
3、玻璃仪器要千燥,避免温度变化。
4、对照:用被测物质以外的物质作空白对照。
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