光照计蛋白质的直接定量（UV法）

Question

如题所述

Answer 1

在蛋白质定量研究中，UV 法（紫外光谱法）是一种直接且简便的方法，特别针对280nm波长的蛋白质进行测量。其操作流程是先测试空白溶液以消除背景干扰，通常需要开启消除320nm“背景”信息的功能。测定过程中，样品的浓度可以通过Warburg公式直接从光度计读数得出，或者通过适当的换算方法，将吸光值转化为浓度。对于蛋白质样品，A280的吸光值需大于0.1A，最佳线性范围为1.0-1.5之间，以确保测量精度。

然而，值得注意的是，Warburg公式在换算过程中，吸光值的微小变化会导致浓度的显著变化，这可能导致读数出现“漂移”现象。实际上，只要A280吸光值的变化范围不超过1%，就可以判断结果稳定。漂移可能源于吸光值的微调引起浓度放大，对于纯净度高、成分单一的蛋白质测定较为适用。

UV直接定量法相较于传统的比色法，优点在于速度快、操作简便。然而，它也存在局限性，容易受到平行物质，如DNA的干扰，并且由于其敏感度较低，对蛋白浓度的要求相对较高。因此，这种方法最适合于那些纯度较高且成分相对简单的蛋白质测试情况。