光照计比色方法

Question

如题所述

Answer 1

在蛋白测定中，常见的光照计比色方法有BCA、Bradford和Lowry等。Lowry法基于Biuret反应，蛋白质与Cu2反应产生蓝色化合物，虽然敏感度较高，但操作复杂，需要添加多种试剂，反应时间长且易受非蛋白物质影响，含EDTA等物质的蛋白不适合。BCA法较新，通过Cu与BCA形成稳定紫色化合物，与蛋白浓度呈线性关系，操作简便，但同样易受干扰。Bradford法以考马斯亮兰反应为基础，敏感度是Lowry和BCA的两倍，操作简单，反应时间短，但标准品选择不当可能导致结果差异大，对去污剂敏感。

初次研究者可能会对不同方法得出的结果不一致感到困惑。实际上，由于反应基团和显色机制的不同，同一样品使用不同方法测得的浓度并不具可比性。比如，Keller等人测试人奶时，Lowry和BCA的浓度显著高于Bradford。同样，即使是同一样品，选择不同标准品，浓度也会有所差异。因此，选择比色法时，应考虑样品的化学构成，选择相似标准蛋白。此外，样品的吸光值低和比色杯颜色的半衰期都可能导致结果偏差，反应时间、温度和pH值等因素也需控制在适宜范围。塑料比色杯比石英或玻璃更推荐，以确保吸光值的准确性。