GB 5009.33-2010 分光光度法
1. 原理
亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定。试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。
2. 试剂和材料
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682规定的二级水或去离子水。
2.1 亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O）
2.2 乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）
2.3 冰醋酸（CH3COOH）
2.4 硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）
2.5 对氨基苯磺酸(C6H7NO3S）
2.6 盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl）
2.7 亚硝酸钠（NaNO2）
2.8 硝酸钠（NaNO3）
2.9 锌皮或锌棒
2.10 硫酸镉
2.11 亚铁氰化钾溶液(106 g/L)
2.12 乙酸锌溶液(220 g/L)
2.13 饱和硼砂溶液(50 g/L)
2.14 对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）
2.15 盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）
2.16 亚硝酸钠标准溶液（200 μg/mL）
2.17 亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）
2.18 硝酸钠标准溶液（200 μg/mL，以亚硝酸钠计）
2.19 硝酸钠标准使用液（5 μg/mL）
3. 仪器和设备
3.1 天平：感量为0.1 mg和1 mg。
3.2 组织捣碎机。
3.3 超声波清洗器。
3.4 恒温干燥箱。
3.5 分光光度计。
4. 测定
4.1 试样的预处理
新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。
4.2 提取
称取5 g（精确至0.01 g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于50 mL烧杯中，加12.5 mL 饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300 mL将试样洗入好并500 mL容量瓶中，于沸水浴中加热15 min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。
4.3 提取液净化
在振荡上述提取液时加入5 mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30 min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，滤液备用。
4.4 亚硝酸盐的测定
吸取40.0 mL 上述滤液于50 mL带塞比色管中，另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0 μg、1.0 μg、2.0 μg、3.0 μg、4.0 μg、5.0 μg、7.5 μg、10.0μg、12.5 μg亚硝酸钠），分别置于50 mL 带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min～5 min 后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用2 cm 比色杯，以零管调节零点，于波长538 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。
5. 分析结果的表述
5.1 亚硝酸盐含量计算
亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按式（3）进行计算：
式中：X1——试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A1——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg）；
m——试样质量，单位为克（g）；
V1——测定用样液体积，单位为毫升（mL）；
V0 ——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。
6. 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
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