如何用HPLC进行蛋白质纯度检测及含量测定?或测相对分子量?

如题所述

首先,蛋白质的测定一般用凝胶渗透色谱
分子量测定:用hplc测定几个分子量已知的蛋白质,绘制分子量与调整保留时间相对应的标准曲线,然后再在相同条件下测未知蛋白的保留时间,用标准曲线对照即可的未知蛋白的分子量;
含量测定:用蛋白质标样配制一系列不同浓度的蛋白质溶液,绘制蛋白质浓度与峰高/峰面积相关的标准曲线,再在相同条件下测位置样品的峰高/峰面积,即可得未知样品的浓度;
纯度测定:保证待测样品中所有组份均出峰的情况下,用目标蛋白的峰面积/峰高除以所有峰峰面积/峰高的总和即可的目标蛋白的纯度。
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第1个回答  2019-12-16
就是准备好你的样品,一定要过滤过的,或者离心的,不能有沉淀。
然后放在在高效液相色谱样品价中
设置HPLC的参数,包括流速,温度等等
之后观察独处的数据有几个特异性吸收峰,就可以看出来是否纯,都是什么杂质
根据读出的OD数据,计算蛋白含量
根据特征谱带预测是什么蛋白,与标准品或者发表的谱带比较,得出相对分子量
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