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转化摇菌后不能及时涂板
酵母双杂感受态
涂板
后
摇菌后
可以再制作成酵母感受态吗?
答:
如果从双杂
涂板
中摇取杂交菌落,再进行再次培养,就可以得到杂交酵母菌株。但是,这些酵母菌株并
不
是真正的酵母感受态,而是通过杂交获得的新菌株,其感受态特性和亲代菌株有所不同。如果需要制作酵母感受态,需要重新构建α和a因子表达载体,通过转染或
转化
等方法将它们分别导入酵母细胞中,从而得到表达α和a...
转化后
涂布,阴性对照培养皿上长有一两个菌落,能否继续在阳性平皿上...
答:
阴性平板上长几个克隆一般的原因是抗性板是筛选压力稍有
不
足。出现这种情况的原因可能是抗生素母液部分失效或者到平板时加抗生素时培养基的温度过高。你可以用新鲜的抗生素母液重新配置抗性板,如果还出现这种情况,还有可能是感受态细胞的问题。如果阳性实验平板上长的克隆比较多,可以继续挑单克隆
摇菌
做进一步...
...
涂
至四缺板上,挑单克隆阳性菌落用双缺
摇菌
,提不出质粒是怎么回事...
答:
可能你挑选的阳性克隆是杂菌或假阳性。建议你再重复试验一次,并做好阳性对照和阴性对照
真菌表达载体怎么构建?求 真菌表达载体构建的师兄师姐指点?万分感谢...
答:
注:①挑单克隆时,一定要挑单一圆润的菌落,有卫星斑的
不
挑。②别忘记往培养基中加AMP。③用接种环挑
菌后
,要在酒精灯上反复灼烧,然后再进行下一次挑菌。三.注意事项 1. 连接产物可短时间在-20℃保存,使用时可以取出进行后续实验;2. 在细胞
转化
时,冰浴和热激要严格控制好时间;3. ...
构建的质粒转入感受态中,然后
涂板
挑克隆
摇菌
,最后小抽试剂盒抽质粒,这...
答:
因为在小抽的时候,SDS加进去
之后
,细菌自己的基因组就被变性的蛋白所包裹了,离心后就会沉淀下去。你取上清液,一般不包含细菌自己的基因组。
请设计试验,利用基因工程手段表达并分离小鼠免疫球蛋白。
答:
1、提小鼠基因组DNA,设计引物进行PCR。将产物连接到载体上,
转化涂
平板挑单菌落后
摇菌
,进行菌液PCR,测序证实为目标序列后进行后续实验。2、从菌液中提取质粒,经双酶切回收目的片段,与经同样酶切的原核表达载体连接,再经酶切鉴定及序列分析证实已成功构建融合表达载体。3、将重组原核表达载体转化入...
农杆
菌转化后摇菌
的问题
答:
加卡那霉素是必加的,其他两种可加可
不
加,加上减少染菌概率。
摇菌
也是一样的。
重组质粒
涂板
后直接
摇菌
测序可以吗
答:
你刚连接完就来酶切检测?看看分子克隆的书啊,亲~ 连接产物先
转化
到大肠杆菌中,比如top10,让
菌
在LB agar plate上生长16hrs,然后挑取单克隆,在2ml LB中培养起来(8hrs),少量抽提质粒后再用限制性内切酶进行酶切检测,将含有正确重组质粒的。
涂布平板法和平板划线法有什么区别,分
答:
稀释涂布平板法是将菌液稀释成
不
同浓度,进行涂平板。平板划线法,是调单个菌落在平板上进行划线。两种方法都可以得到独立的菌株。稀释涂布平板法一般多用于筛选菌株,平板划线法一般多用于纯化菌株。其实两种方法在做细菌试验中都可以用到,不过划线法则相对简单些,直接挑菌划线,而涂平板则麻烦些还要
摇菌
...
有些质粒没有和目的基因结合,进入受体细胞,检测也能检测出有质粒,但它...
答:
在带有目的基因的质粒转入受体细胞,
摇菌后涂板
划线,挑取单克隆菌摇菌扩繁,提取质粒,进行PCR扩增后跑胶鉴定有无目的片段。检查没有目的片段的话,说明质粒和目的基因结合
不
成功。
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涂板后长菌可以放4度吗
转化摇菌可以摇超过一小时吗
菌液放4度沉淀了
菌液摇过了会怎么样
感受态能直接摇菌吗
为什么摇菌不能超过16小时
涂布平板时菌液未干
细菌转化涂板一般几个板子
质粒涂板要把液体涂干么