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转化摇菌后不能及时涂板
...涂布营养缺陷型板,挑取单克隆阳性菌落,用双缺
摇菌
,提不出质粒是怎么...
答:
因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果
不能
互作,就不生长。
转化
的感受态有氨苄抗性但是提不出来质粒?
答:
细菌是否产生抗性?我
不
加质粒,直接用感受态
涂板
,看是否能长出来。质粒提取是否出问题了?挑起菌落,去
摇菌
,而不是用菌落去提质粒。最后,你是如何知道没有质粒的?电泳检测还是PCR检测?如果电泳检测,可能是质粒含量太低,检测不出来(可以将提出来的质粒重新
转化
一次,这样会比连接产物的效率高)。
关于 克隆的问题。假如我有有一个基因片段,未知序列。我可以把它连接...
答:
T载体分两种。一种是末端带有A的典型的T载体,这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接,另一种是平末端的T载体,这种T载体末端没有A,它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的片段的连接,因为你的序列是未知的,为保万无一失,建议你最好先用taq给它处理下,即末端加A然后再和...
如何获取自己想要的质粒
答:
转化
~
涂板
~挑取单克隆~
摇菌
扩大培养~收集菌体提取质粒~
鲫鱼的荧光素酶的大小?还有鲫鱼荧光素酶融合载体的构建步骤。_百度知 ...
答:
这一反应非常节省能量,几乎所有输入反应的能量都被
转化
为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯,只有越10%的能量被转化为光,剩余的能量都变为热能而被浪费。荧光素酶分析:荧光素或荧光素酶不是特定的分子,而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制...
冻融法制备农杆菌感受态细胞,并且
转化
质粒相关问题。
答:
实验结果
不能
肯定的说明结果是成功的,做实验的阴性对照也很重要,阴性对照必须做出阴性结果。如楼下的网友所说,可能是你的感受态
菌
被质粒污染了。现在我回答一下你的 追问吧:“未
转化
质粒的感受态细胞在同样的LB上
涂板
也长出单菌落”,那么这个长出的单菌落你有没有做菌落PCR的鉴定?如果你没有做...
未知基因组DNA提纯后pcr扩增,出现的电泳应该是什么样的怎样分析呢。如图...
答:
你的问题
不
明确。首先你要给出PCR的引物,说明这对引物是扩增什么基因的,这个目的基因的长度,然后通过电泳条带与两边的marker比较,推算出其长度,如果符合你需要扩增的基因的长度,就可以认为是正确的了。从电泳图谱上可以看出,扩增的条带大于1kbp,选取的DNA marker小了,这样判断扩增产物的大小不够...
转染后的HUVEC进行培养,筛选用kana的浓度应该是多少
答:
不
行的呀,amp和kan都是筛细菌用的,对细菌有杀死作用,但是对人类细胞无毒啊。医院输液都可以用卡纳的,要是对细胞有毒的话这不是相当于杀人吗...质粒上的kan抗性只是为了连接
之后转化涂板
和
摇菌
时筛菌用的,不是转染之后筛细胞用的...如果筛细胞的话,要用puromycin或者G418...ps。你们用lipo...
酶切不出来,是怎么回事???
答:
这说明你的酶切体系可能有问题,需要优化一下。
关于原核表达小量检测的问题
答:
可以试着培养久一点,2h死的可能是没有抗性能力的那部分细菌,有抗性的克隆因为量太少而显得
菌
液很清澈,摇床摇时间久一点(大肠杆菌是14min一代,从几个到几百万个,需要时间的),过夜,试试。我以前也遇到这种问题
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