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荧光定量的引物一般是多长
荧光定量
PCR(qPCR)——
引物
设计篇
答:
其次,
引物长度应控制在18-30nt,产物长度保持在100-300bp
,避免太短导致非特异扩增,过长则可能形成二级结构影响PCR效率。引物的GC含量应保持在40%-60%,Tm值建议在55-65℃,上下游引物尽量接近,避免3'端末端选择A,以减少错配引发效率的差异。设计时还需考虑碱基分布的随机性,避免连续的G或C序列...
实时
荧光定量
PCR中两种
引物
的设计有什么要求
答:
12.做荧光定量产物长度80-150bp最好,最长是300bp.13.引物设计避免DNA污染
,最好跨外显子接头区。14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70%或者有8个互补碱基同源。15.查看有无假基因的存在。假基因就是无功能的DNA序列,与需要扩增的目的片段长度相似。16.TM值在55-63度之间。17. .引物与...
荧光定量
PCR
引物
设计为什么要在100-200bp之间
答:
楼主说的是扩增子,即两
引物
目标位点之间的序列长度。PCR过程中,扩增就跟修路一样,越长越费工。在能够保证特异性的情况下,当然是越短越有效率,100-200bp就是综合两方面的考虑而建议的最佳扩增子长度吧。其实有的人会说50-250bp,这跟各人经验和具体实验条件有关。
荧光定量
PCR
的引物
能直接跑普通PCR吗?
答:
可以的 不过扩增出来的片段也就一两百bp
,要用2%的琼脂糖胶跑电泳检测
我要做
荧光定量
RT-PCR,产物长度是73bp,可以吗?
答:
可以的,
50bp到150bp都可以
,只要你设计的引物探针特异性好,是可以做出来的;不过一般都是100bp-150bp左右比较好,我研究过中山达安公司09年的H1N1检测试剂盒,通过TA克隆得知,他们的检测H1N1病毒的H1跟N1两管混合液中扩增目的片段的长度都是70bp左右。如果你的引物探针以及合成好的了话,就做实验吧...
实时
荧光定量
PCR中两种
引物
的设计有什么要求
答:
引物长度,20bp;Tm值可以设置在55度(实验的时候可以用60度退火,两条引物的退火温度不要相差大于2度);产物长度,100-150bp(如果没有合适
的引物
,产物长度可以设置在80-200)。如需设计引物,可以微信搜索“为青生物”,由专业人员提供免费的
荧光定量
PCR引物设计服务。
怎样用Primer5设计
荧光定量
PCR
引物
,怎样设置各种参数,求大神指点_百度...
答:
选取 目标片段长度在80-250bp
的引物
,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,
一般
我会多设计几个,选取最好的那个~
做qpcr的mrna长度
答:
做qpcr的mrna长度约为100nt左右。实时
荧光定量
PCR(qPCR),是利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,从而对起始模板进行定量及定性分析的一项技术。qPCR
引物
的好坏会直接影响到实验结果,所以引物设计是整个实验中非常关键的一步。nt是指核酸分子,不同的mRNA长度不同,包括的...
荧光定量
PCR
的引物
与普通PCR引物能否通用?
答:
主要看你的产物大小,如果你的PCR产物在80-250bp之间,且用的是SYBR法或有合适的探针,那还是通用的
半
定量
RT-PCR设计
引物
时产物长度为多少合适
答:
荧光定量一般
限定在100-250bp间,半定量似乎没有太严格的限制,可以放宽到500-600bp吧,再长些应该也问题不大,可能对逆转录要求更高些
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