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考马斯亮蓝法测蛋白质含量标准曲线
植物细胞骨架观察中
考马斯亮蓝
有什么用
答:
000μg/ml,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。考马斯亮蓝有g250和r250两种。其中考马斯亮蓝g250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝r250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
流程 该方法用于...
考马斯
溶液与
蛋白质
溶液为什么要摇匀
答:
2—5分钟即呈最大光吸收,至少稳定1小时。在0.01—1.0mg
蛋白质
/ml范围内均可。该法操作简便迅速,消耗样品量少,但不同蛋白质之间差异大,且
标准曲线
线性差。高
浓度
的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。
考马斯亮蓝
...
蛋白质浓度测定
的
标准曲线
图
答:
蛋白质浓度测定的
标准曲线
图如下:蛋白质浓度的测定方法有:1、 双缩脲法:双缩脲法是第一个用比色
法测定蛋白质浓度
的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。2、...
考马斯亮蓝法测蛋白质
时为什么
浓度
越高而吸光度越低
答:
考马斯亮蓝
溶液应为酸性,并且变成蓝绿色是就不能再使用了 实验时一定要最后加入
蛋白质
溶液,另外,样品中的Tris、乙酸、2-巯基乙醇、EDTA等物质对实验结果有少量颜色干扰,可以在做
标准曲线
时可以用缓冲液代替蒸馏水,就可以将干扰扣除,但是大量的去污剂如SDS对颜色的影响太大不容易去除,只能想办法从...
说明常用
蛋白质测定
方法的原理,并对各种方法加以比较
答:
出现沉淀,过滤除去。每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min。根据
标准曲线
计算待测样本的
浓度
。参考资料来源:百度百科-
蛋白质测定
参考资料来源:百度百科-
考马斯亮蓝法
...
如何选择合适的
蛋白含量测定
方法
答:
选择一种
蛋白测定
方法时,需要考虑两个重要因素:缓冲液的化学组成和检测的
蛋白量
。基于dford方法的Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定灵敏度高,可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质,DC蛋白测定却可以兼容。如果蛋白是在loading buffer中,准备跑1D或2D电泳...
bradford
法测蛋白浓度
怎么测?
答:
测定:另取两支干净的试管(做一重复),加入合适
浓度
的待测样品,使其测定值在
标准曲线
的范围内,测定方法同上,由样品液的吸光度查标准曲线即可求出
含量
。注意事项:1、 如果要求严格,最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收,因为这段时间内颜色是最稳定的。2、 若选择在旋涡混合器上混合,注意...
考马斯亮蓝测定蛋白质
的原理是什么
答:
需要注意的是,不同蛋白质与考马斯亮蓝G-250的结合能力可能存在差异,因此在制作
标准曲线
时,通常选择与待测样品性质相近的蛋白质作为标准品,以减少测定偏差。综上所述,
考马斯亮蓝测定蛋白质
的原理是基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合反应,通过测定光吸收值来定量测定蛋白质的
含量
。这种方法操作...
考马斯亮蓝测定蛋白质含量
时应注意什么?
答:
测定中蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。利用
考马斯亮蓝法
分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作
蛋白标准曲线
的时候,蛋白标准品最好是从低浓度到高
浓度测定
,防止误差。
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度
存在的误差?
答:
是的,
考马斯亮蓝测定蛋白质浓度
的方法是选用已知浓度的蛋白进行梯度稀释后,测定OD595,而实际上考马斯亮蓝和蛋白质的结合程度与蛋白质分子上的碱性集团数量有关,因此不同的蛋白质和考马斯亮蓝的结合能力还是有一定差异的,测定蛋白质浓度最好的方法是Lowry法 ...
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