考马斯亮蓝g-250（coomassie
brilliant
blue
g-250）测定蛋白质含量属于
染料结合法的一种。考马斯亮蓝g-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝g-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1
000μg／ml，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有g250和r250两种。其中考马斯亮蓝g250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝r250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如
核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如tritonx-100、sds、np-40等。
1．bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝g-250溶于50m1
95％
乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用
蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．
标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于100~1
缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用pbs)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其
吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。