考马斯亮蓝测定蛋白质含量时应注意什么?

如题所述

在试剂加入后的5-20min内测定光吸收,因为在这段时间内颜色是最稳定的。测定中蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作蛋白标准曲线的时候,蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定,防止误差。

扩展资料:

注意事项:

测定时用同一种标准蛋白配制成覆盖待测样品蛋白浓度的标准蛋白溶液,然后加等量考马斯亮蓝G-250,混匀后用紫外分光光度计测定个标准蛋白样品的吸光值,并测定待测样品的吸光值,所有样品重复测三次。

最后以蛋白标准溶液浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,计算出回归方程,如Y=aX+b,让后把待测样品的吸光值代入回归方程,算出待测样品浓度。

参考资料来源:百度百科-考马斯亮蓝法

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