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基因克隆表达不成功的可能原因
如题所述
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推荐答案 2012-06-10
1 克隆的序列问题,发生突变等,导致提前终止等;
2 构建载体时,发生移码;载体的功能元件不完整(
启动子
,终止子等)
3 基因沉默,形成包含体等(看你在那种系统表达,有很多可能性了,
具体问题具体分析
)
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影响
克隆基因表达的
因素有哪些?
答:
取决于提供细胞核的亲本的
基因
形和
克隆
后子代的生存环境
为什么我们
基因克隆
老
失败
答:
3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?
如果是Taq的话当心是在引物区或酶切位点造成点突变使得切不动
。
从高等生物
基因
组中
克隆的
完整基因为什么在大肠杆菌中不能正确
表达
?
答:
真核生物与原核生物的启动子不同。而且真核生物的
基因
通常是间隔基因,即外显子和内含子相间排列。真核生物的完整基因直接转入大肠杆菌,没用相应的启动子不能启动mRNA转录,而且内含子也不能正确剪切,当然不能正确
表达
。利用胰岛素的mRNA进行RT-PCR,扩增出它的cDNA,再将cDNA连接在有完整表达单元的...
基因克隆可能
遇到什么困难?希望说的详细点
答:
1是目的片段的获得 2是酶切 3是连接 4是转化和PCR检测 这些步骤都有不同的困难,一般要加相应的对照实验的。
基因克隆
和序列分析相关问题
答:
一个反应
成功
一个取消,
可能
存在为非特异扩增。或者单引物扩增现象存在。还有就是引物问题,一般兼并引物、随机引物及标记性引物、不纯的引物及长片段引物等不适合测序。测序必须为特异性引物。还有就是可能存在结构.具体
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