考马斯亮蓝法测蛋白质时为什么浓度越高而吸光度越低

Question

如题所述

Answer 1

吸光值是正的，浓度是负的话，应该和你做的标准曲线有关系，建议重新做下标准曲线，r值最起码得有两个9吧。还有就是，你的蛋白浓度肯定比较低，所以你可以把标准品做个浓度比较低的曲线。

Answer 2

透明质酸中的蛋白质指的是一种蛋白聚糖中的蛋白质吗，是否应该考虑除去其中的糖胺聚糖，将蛋白质纯化，因为考马斯亮蓝需要与蛋白质结合才能显色，样品中的糖胺聚糖可能有影响，或者是样品污染
考马斯亮蓝溶液应为酸性，并且变成蓝绿色是就不能再使用了
实验时一定要最后加入蛋白质溶液，
另外，样品中的Tris、乙酸、2-巯基乙醇、EDTA等物质对实验结果有少量颜色干扰，可以在做标准曲线时可以用缓冲液代替蒸馏水，就可以将干扰扣除，
但是大量的去污剂如SDS对颜色的影响太大不容易去除，只能想办法从样品中去除去污剂，