感受态细菌转化后在氨苄板上培养12个小时,板上长出菌了，挑菌后摇菌

感受态细菌转化后在氨苄板上培养12个小时,板上长出菌了，挑取单菌落，加AMP+摇菌，但是菌液PCR后跑胶的结果并没有看到目的基因的带（2000bp），只有一条1000的带。

推荐答案 2017-08-05

实验结果不能肯定的说明结果是成功的，做实验的阴性对照也很重要，阴性对照必须做出阴性结果。如楼下的网友所说，可能是你的感受态菌被质粒污染了。现在我回答一下你的追问吧：“未转化质粒的感受态细胞在同样的LB上涂板也长出单菌落”，那么这个长出的单菌落你有没有做菌落PCR的鉴定？如果你没有做菌落PCR的鉴定，还有一种可能就是你的板子上的抗生素浓度不够，导致长出了菌，这个菌到底含不含有你的目的质粒，要做PCR鉴定，不要光看菌落长出与否。建议你把板子的抗生素浓度提高，同时看看未转化质粒的感受态细胞在同样的LB上涂板也长出的单菌落的PCR鉴定结果，从而判断是否仅仅是感受态被质粒污染了

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挑单克隆摇菌一般多少培养基答：1. 将质粒转入DH5α的感受态态细菌中，涂布于含有氨苄抗性的固体培养板上，过夜培养。2. 挑选单克隆，转接3-5ml含氨苄抗性的液体培养基，37度振荡培养10-12h。3. 提取质粒（步骤省略），并将质粒进行进行琼脂糖凝胶电泳，一般可以观察到2-3条带，选择其中最下面一条带（超螺旋形式）大小约为2000左右...

转化后涂布,阴性对照培养皿上长有一两个菌落,能否继续在阳性平皿上...答：阴性平板上长几个克隆一般的原因是抗性板是筛选压力稍有不足。出现这种情况的原因可能是抗生素母液部分失效或者到平板时加抗生素时培养基的温度过高。你可以用新鲜的抗生素母液重新配置抗性板，如果还出现这种情况，还有可能是感受态细胞的问题。如果阳性实验平板上长的克隆比较多，可以继续挑单克隆摇菌做进一步...

...感受态细胞转化之后再提取质粒,铺板有单菌落,摇菌也能摇浑,但是就...答：先一步步找原因。是实验步聚问题，还是试剂盒的问题，如果是试剂盒的问题，推荐您用鼎国生物的。价格应该还实惠点。

质粒转化农杆菌感受态后,挑斑摇菌菌液PCR后无条带。答：质粒转化应该比较容易，要检查一下引物对不对。其次是你的模板够不够，因为农杆菌中质粒拷贝数很低。可以提出质粒后再来PCR

转化的感受态有氨苄抗性但是提不出来质粒?答：这个问题可以从几外方面着用排查，一个，氨苄是否失效？失一个厂家的或者批次的试一下。细菌是否产生抗性？我不加质粒，直接用感受态涂板，看是否能长出来。质粒提取是否出问题了？挑起菌落，去摇菌，而不是用菌落去提质粒。最后，你是如何知道没有质粒的？电泳检测还是PCR检测？如果电泳检测，可能是...

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