western 跑胶上样问题

Question

western blot跑胶时有两个样品体积略大（为了保持上样量一致，最后算出来多了）导致加样加不完，然后我先用低电压跑了5min，再补加的样，这样对结果影响大不。

Answer 1

非常不建议你这样上样！

如果你两次上样的样品在浓缩胶里面没有汇合到一起的话，你跑出来的样用抗体孵育就很可能出现两条条带，根本没法比较大小。

我一般上样都在10～20ul左右，完全没问题。不知道你怎么要上这么多……追问

我们一般取15ul样品，加10ul loading。跑完了，前面我用60v,20分钟左右跑到一条线上换了80v，跑上分离胶大概1cm左右了

追答

25ul确实有点多，但每个人的样本都不一样的，我们是直接用loading buffer裂解细胞，上15ul左右，也就不用再混loading和样品了。 如果你浓缩胶够长的话也可能跑到一起去，但结果我真不好说

追问

我明天看看结果吧 。。。