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wb一抗和内参是分开孵的吗
如题所述
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推荐答案 2024-01-21
是。一抗是针对目标蛋白的特异性抗体,而内参是用于保证实验的可重复性和可比性的内源性参照蛋白,在实验过程中,通常先进行一抗的孵育,以检测目标蛋白的表达情况,然后在清洗掉未结合的一抗后,进行内参的孵育。
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wb
中
一抗和内参
怎么加的
答:
western blot实验中,完成电泳及电转膜之后,转完后将膜用1×丽春红染液染5min(于脱色摇床上摇)。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白,根据目的蛋白大小选择合适的内参,剪开目的蛋白及内参条带,分别进行目的条带
一抗的孵
育
和内参的孵
育。按照所用抗体说明书,用TBST按说明书建议比例稀...
一抗孵
育后
内参
要洗脱吗
答:
要。1、
一抗孵
育后内参和目的蛋白相差较大,孵育后洗脱避免了内参和目的蛋白对二抗的竞争性结合,一抗孵育后要洗脱内参。2、不洗脱时
内参一抗
结合二抗的能力强于目的蛋白,会导致目的蛋白做不出,洗脱有利于两者的结合。
...为68KD
和内参
为55KD,靠的非常近,不好
分开
分别
孵
抗体,也不太适合同...
答:
实验室的办法是用TBST洗膜洗过夜,再重新
孵
育
一抗
、二抗,好像不用再封闭了。我试过,效果还可以。
wb1抗
一定要密封
孵吗
答:
一定
。封闭液应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的表位,也不与抗体或检测试剂有交叉反应。
westernblot
内参
GAPDH成功了
答:
我一想,有点不合理吧。我买的GAPDH总共才25ul,一次性全部用了。好在问了肾内科的LLL,跟我解释了一下。原来是抗体和
一抗
稀释液的配比是1ul和4000ul,果然这样才合理。就这样开开心心地常温
孵化
抗体3h。在这期间去了趟病理科,把昨天弄好的病理组织块切回来,准备下一步免疫组化。3.去完病理科...
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