原代细胞构建稳定细胞株需要什么条件？

Question

如题所述

Answer 1

转染 24 小时后，细胞被消化并计数。将细胞植入 96 孔板中，以确保每孔 2－3 个细胞，从而获得单克隆。细胞粘附在壁上后，添加抗生素进行筛选。筛选时间和浓度取决于细胞。通常，G418 生效一周，嘌呤 2－3 天。脂质体单克隆的筛选时间长且效率低，仅约 1％。病毒转染， 首先包装细胞，通常是 293 个细胞，以包装病毒，然后用病毒转染靶细胞。

包装病毒取决于不同类型的病毒，一般需要 3－5 天，应测量包装病毒的滴度，并根据滴度确定转染靶细胞的病毒量，在转染靶细胞后 1－2 天，通过抗生素筛选稳定的细胞系。转染获得稳定细胞系的效率高，但步骤繁琐。目前，许多公司提供构建稳定细胞系的技术服务，如杭州那边的波因，南京的凯基那样，他们可以为各种载体和细胞系的构建提供一整套技术服务。

它是脂质体转染后克隆和筛选的稳定细胞系，另一种是利用逆转录病毒和慢病毒转染来筛选稳定的细胞系，通过蛋白酶或其他方法从人体组织，如人体组织里面的小鼠组织，大鼠组织，兔组织等， 和体外模拟体培养获得的细胞，他们被称为原代细胞，一般认为第一代培养的原代细胞和传给第 10 代的细胞统称为原代细胞培养。

使其原代细胞在人工条件下存活，生长，繁殖和传递，研究细胞生命过程，细胞癌变，细胞工程等问题。通过选择方法或克隆形成方法从原代培养细胞中获得的具有特殊性质的细胞或标记物称为细胞系，一般认为，细胞系是通过单细胞隔离培养或筛选，由单细胞增殖形成的细胞群。

Answer 2

通常，G418 生效一周，嘌呤 2－3 天。脂质体单克隆的筛选时间长且效率低，仅约 1％。病毒转染， 首先包装细胞，通常是 293 个细胞，以包装病毒，然后用病毒转染靶细胞。

Answer 3

实验环境稳定，温度适宜，原代细胞健康，满足了这几个条件后，等待一些时间，就可以进行培育了。

Answer 4

原代细胞构建稳定细胞株是需要在特定的环境中才行，环境要符合原代细胞的构造，而且周围的原代细胞不能出现任何的破损情况。