第1个回答 2013-04-21
（2）细胞株的检定
染色体检查
新 细胞株建株过程中，每8～12世代应作一次染色体检查，一株细胞整个生命期内连续培养过程中，至少有4次染色体检查结果。
细菌、真菌、支原体及病毒检查
致肿瘤性检查 ：每8～12世代，做一次细胞株异种移植试验，观察细胞株有无致瘤性质。
细胞株鉴别试验
2.定义和术语
原代细胞来源，包括猴肾、鸡胚、地鼠肾、家兔肾、狗肾和鹌鹑胚，以及其他组织等。
原代细胞是用正常组织，以适当的消化液分散细胞进行培养。
原代细胞培养是以适当的消化液消化正常动物组织以分散细胞，培养成单层细胞直接用于生产，只限于原代或少数几代（一般1～5代）内，用于生产的细胞以生物学性状不发生改变为原则。
细胞生长（营养）液：是提供细胞生长繁殖的培养液，可含少量动物血清，多为小牛或胎牛血清（常用10％）。
细胞维持液：是提供细胞维持正常新陈代谢的培养液，不含动物血清（或少量，常用2～5％），只维持细胞正常生存，可满足病毒复制等。
3.鸡胚细胞的分离，在IFN研究中常需要它来制备测定IFN活性的水泡性口炎病毒（VSV），以及用以滴定病毒。
4.常用消化液的配制方法 ：
（1）1％胰蛋白酶溶液的配制：
①取胰蛋白酶10g（一般采用活力为1：250的胰蛋白酶，即1份胰蛋白酶能解离250份酪蛋白）；
②用少量Hanks液先将胰蛋白酶粉末调成糊状；③补足Hanks液至1L，振摇混匀，置4℃冰箱内过夜；
④用G6玻璃滤器或用分子滤膜过滤除菌；
⑤分装小瓶，低温冰箱冰冻保存备用，同时取样作无菌试验；
⑥使用时用Hanks液稀释成0.25％或0.125％，并用NaHCO3调至pH7.0或偏碱。
（2）0.02％EDTA溶液的配制：
①称取EDTA0.2g；
②用1Lhanks液溶解；
③15～20min高压灭菌；
④分装小瓶，4℃冰箱保存备用。
（3）胰蛋白酶－柠檬酸盐配方：
胰蛋白酶（1：250）2.5g；
柠檬三钠2.96g；
氯化钠6.15g；
酚红（1％）1.5ml；
无离子水加至1L。
用NaOH调至pH7.8（约1mol/L NaOH 2ml），用滤纸粗滤，用G6玻璃漏斗过滤，分装小瓶，低温冰冻保存，并作无菌试验
（4）胰蛋白酶－EDTA溶液的配制：
1份0.25％胰蛋白酶－柠檬酸盐；
4份0.02％EDTA溶液。
五、细胞计数
1.计数方法
（1）先用培养基将细胞悬液作适当稀释。
（2）用吸管吸取少量细胞悬液，滴于计数板上盖玻片一端，让液体自动进入盖片下间隙，勿留气泡。
（3）镜下观察并计算出四角大格内的细胞数，计数时注意只计上线和右线的细胞。
按下式计算细胞浓度：
细胞数/ml＝4大格中细胞总数÷4×10000×稀释倍数
2.区别细胞死活的方法
（1）台盼蓝
（2）苯胺黑
（3）结晶紫－柠檬酸
六、细胞传代
1.悬浮细胞地传代 ：
悬浮细胞的传代比较容易，只要加上一倍或几倍的生长液，然后分种几只培养瓶即可。
2.贴壁细胞的传代：
贴壁细胞需经消化后分种 。
七、细胞的冻存和复苏
1.细胞的冻存
降温步骤：
2．细胞的复苏
复苏时总的要求是快融
八、细胞培养用水处理
1.水处理装置
细胞培养对水质的要求很高，不仅不能有微生物污染，而且也不能有有害的离子存在，一般均采用蒸馏和离子交换相结合的方法，最后再通过除菌灭菌。一般要求水的电阻值大于18MΩ
2.纯水离子交换法制造原理
所谓纯水离子交换和除菌器是将原水中的盐类，游离酸，碱，微生物及其他杂物全部除去的处理方法。
用此法制造的纯水要比蒸馏水纯得多。
（1）阳离子交换树脂：
R(-SO3H)2+Ca(HCO3)2 R(-SO3)Ca+2H2CO3
R(-SO3H )2+ NaCl R(-SO3)Na+HCl
R(-SO3H )2 + Na2SO4 R(-SO3Na)2+H2SO4
（2）阴离子交换树脂：
R≡NHOH+HCl R≡NHCl+H2O
R≡NHOH+H2CO3 R≡NH(HCO3)+H2O
R(≡NHOH)2+H2SO4 R(≡NH)2SO4+2H2O
3.装柱步骤
4.离子交换树脂再生
无论是新处理的树脂还是使用过的树脂，都要进行再生 。