55问答网
所有问题
当前搜索:
引物直接加在目的基因两端吗
PCR5'
引物
最后一个碱基与
目的基因
错配,能P出来吗
答:
疯了………你这个是要实验用还是要交作业啊………
引物
设计首先需要找到你要P出来的序列。让我们假设这一段就是你要P的东西………第二步就是在该序列或者附近
直接
用原序列做引物。你这个为例的话,5'就是TCGATG,而3'就是TAGGCT。注意5'就是原序列而3'则是互补序列。还需要注意的是,两个prime...
引物
为什么要加同源臂
答:
原因是为
目的基因添加
同源臂是通过设计特殊的PCR
引物
,使用这对引物扩增目的基因来完成的。引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以共价键形式连接,这样的分子称为引物。
荧光定量PCR相对定量,
目的基因引物
浓度不同,b-action需要以不同浓度扩增...
答:
不需要,一般体系里面
引物
都是过量的,b-action的含量相对恒定的,你相对定量看的事ΔΔCt值
PCR怎么获得
目的基因
答:
PCR是用来将
目的基因
扩增的方法,要获得目的基因要用别的方法。酶切
是否
目的基因
在PCR扩增时不用在
引物
中加入酶切位点,就可与pGEM-T载体...
答:
不用的,因为你PCR的时候加的 Tag酶,在扩增过程中它会在末端加上A...T vector就会与A结合了 你可以在下一步步骤中,选择酶切位点去剪切后 再与你的
目的
载体连接。
在做基因克隆时,
目的基因
和载体相连,可是怎么确定用哪两种酶啊?目的基...
答:
由不同的限制性内切酶 酶切后 采用荧光素标记的cDNA分子探针杂交 看酶切片断是否含有目的基因 不同的内切酶有自己的特异识别位点 为一小段DNA序列 此段序列双链被解开 分配
到
上下两段 (形成粘性末端)如果
目的基因两端
含有此序列 则目的基因被切下 限制性内切酶切割DNA片断自然会产生粘性末端(单链片断...
...PCR如果
目的基因
扩增出来了是不是条带中的
引物
二聚体就没有了呀...
答:
不是,
引物
二聚体的存在与你引物的设计有关,另外也与剩余引物的量有关(化学平衡)。只要是你在设计引物时要注意,引物设计不好会极大影响PCR的效率,就算是
目的基因
扩出来也不行。
构建质粒载体中用PCR获得
目的基因
,其中涉及的
引物
为什么要加酶切位...
答:
获得
目的基因
后一般需要将目的基因连接
到
质粒载体上,在
引物
上加酶切位点可以使后续的连接过程简单、可控。因为可在载体和目的基因上酶切产生相同的切口。也有不需要加酶切位点的T载体,但连接过程效率不高还会有反向的错误连接。
设计
引物
的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么...
答:
添加
保护碱基的目的 在分子克隆实验中,有时我们会在待扩增的
目的基因
片段
两端加
上特定的酶切位点,用于后续的酶切和连接反应。但实验证明,大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基,才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断。因此在设计PCR
引物
时,为...
如何通过已知的目的蛋白肽段序列设计
引物
来获取
目的基因
答:
不必对序列做任何处理,
直接
设计
引物
即可啊。1. 对提出的总RNA逆转录时,mRNA对应的cDNA有一条链与mRNA序列相同,为有意链,一条反向互补(reverse compliment, rc), 为模板链。你在纸上一画应该就清楚了,以mRNA序列(有意链)中ATG开始的20个碱基作为正向引物,以模板链TCA(TGA的反向互补序列)...
棣栭〉
<涓婁竴椤
4
5
6
7
9
10
8
11
12
13
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜