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引物直接加在目的基因两端吗
关于
引物
设计
答:
要定量分析是指要做Realtime PCR吧。那么
引物
需要满足的是 1.特异性片段,
在基因
组里特异性比较高;2.最好跨内含子设计两引物,可以避免基因组干扰;3.产物长度在200bp以内比较好 如果只是RT-PCR,那么片段长度也要小于500bp,然后选择跨内含子比较好。至于如何确定保守区特异区,把基因全长在blast...
一个
目的基因
在质粒上,如何将其扩增出来并做实时荧光定量PCR?
答:
是这样的,PCR的原理就不阐述了,实时荧光定量PCR的基本原理是,在PCR体系中,加入
引物
的同时,加入能与
目的基因
结合的带荧光标记的寡核苷酸,一条完整的寡核苷酸上有荧光淬灭基团,它能吸收荧光信号。 DNA聚合酶要选择具有3'
到
5'外切酶活性的酶,这样在PCR扩增过程中,从引物方向过来的DNA聚合酶会把...
我知道某
目的基因
的cDNA序列,要pcr扩增此基因cDNA全长,
引物
怎样...
答:
如果是要表达该
基因
的话把CDS区扩增出来就可以了 想扩增全场的话只能
引物
设计在前后端了 不过后面是Poly T, 所以估计反转录的时候得加一个adapter 这样才能扩增完整的出来 还是比较麻烦的 而且全长的话太长了 要用高保真的酶 很容易出现错配和突变 ...
三
引物
法和
基因
方向
答:
末端。双
引物
法的基本原理与三引物法相似,只是需要急性两轮PCR 扩增。三引物法和基因方向是末端,一组以基因组DNA特异引物LP和RP扩增
目的基因
片段。
同一模板加双向
引物
如何筛选出所要的
目的基因
在电泳图中怎么找所要的...
答:
示意图如下 1===为
目的基因
---===--- ---===--- 2只看一条链,第一次扩增,下面那一条链最左边是
引物
之一 ---===---① ===---② 3②再扩增,用引物2(③的最右边是引物2)===---② === ③ ③就是目的基因了.电泳图里就是最前面的那个了,它最短.
PCR反应原理中
引物
是什么,从哪里来,有什么作用
答:
引物
是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补.在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段
目的基因
的核苷酸序列,根据这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合...
求教在
基因
克隆中要设计
引物
的方法!???
答:
如果是这样的话 1 你先看你想连接的载体上面有哪些克隆位点(酶切位点可以用),然后看你原来的质粒上
基因两端
有没有这些位点,如果有,ok,同时用两个酶切质粒和载体,然后
目的
片断相连;2 质粒上没有想要的位点,就用
引物
将基因扩增出来,分别在上下游引物的5端加上特异酶切位点和保护碱基,PCR...
引物
设计时为什么要设计两个?他们两个是什么关系
答:
上游
引物
和下游引物。分别和DNA的两条链的3'端结合。想要扩增
目的
片段就是上游引物和下游引物之间的序列。
我现在要做荧光定量PCR,有3个
目的基因
,以ACTIN基因作为内参,分析其在...
答:
看你的描述,应该是4个分组,做3个
目的基因
允许有6个复孔 或者减少复孔量每个目的基因设计2-3个
引物
,因为引物很便宜,选择溶解曲线最好的做。开始做都会出现复孔不稳定的情况,做几次操作熟练了复孔数值稳定之后就可以不用复孔了,
直接
把组内样本一个个上上去。关于数据分析,实时荧光定量PCR仪会...
半定量rt pcr内参和
目的基因
的
引物加
的量相同吗,能否放在同一管中跑PCR...
答:
引物加
的量应该相同,能放在一管里跑最好,但是分开跑也可以接收(一般都是这样)
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