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引物直接加在目的基因两端吗
...
基因
,进行转染表达,但是设计的
引物
无法扩增出
目的
片段……急求!_百 ...
答:
就是从两侧的UTR区开始设计。但是我不敢保证啊。所以我建议您先在UTR区设计
引物
,扩出来长片段后再扩增您的
目的
片段。这样会容易点。P.S.保护碱基的作用是可以使PCR产物
两端
的酶切位点被识别,从而可以
直接
酶切PCR产物使其产生粘性末端,以便进行后续的克隆。这和PCR能否扩增出来没有任何关系。
...而且溶解曲线也比较好,但是
目的基因
完全跑不出来
答:
问题有可能如下:1) 模板制备有问题。你可以用普通PCR扩增,然后电泳确定是不是模板有问题?2)
引物
问题:引物设计的好与否,对Realtime 结果至关重要! 可以用普通PCR确定你的引物扩增效率如何? 模板可以选取一个阳性质粒当模板。3) Realtime 体系配置出问题:好好想一下,该加的东西都加了没?
已知
引物
序列,如何通过primer5.0找到
目的基因
的长度
答:
你知道你的基因名了,那你还用primer5.0找什么
目的基因
的长度啊?primer5.0只能找到你目的产物的片段大小,你
直接
少年宫NCBI,搜索gene名,就可以得到你要的基因的信息,不是NM号,NM是mRNA的信息,你要找到全基因的序列
利用PCR技术进行DNA扩增时需要加入一对碱基互补的
引物
为什么错...
答:
引物
(primer),是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的。加入一小段单链DNA或RNA。
我的
目的基因
489bp,载体大约3kbp,连接后转菌挑单克隆,菌液PCR条带在75...
答:
正常啊,你菌落PCR做出来的条带是带上一部分载体序列的啊,所以必然要比你的PCR产物大一些没错呀!
用PCR技术合成
目的基因
是的引物只能是一条模板一个
引物吗
还是可以多个...
答:
模板大多数为一条,也可为多条,
引物
至少两个(三五处复制)启动与终止各一个为模板上公用。希望可以帮到你
关于
引物
设计
答:
要定量分析是指要做Realtime PCR吧。那么
引物
需要满足的是 1.特异性片段,
在基因
组里特异性比较高;2.最好跨内含子设计两引物,可以避免基因组干扰;3.产物长度在200bp以内比较好 如果只是RT-PCR,那么片段长度也要小于500bp,然后选择跨内含子比较好。至于如何确定保守区特异区,把基因全长在blast...
基因
位点突变为什么要在gdna上设计
引物
?而不是在cds上进行
答:
在
基因
位点突变研究中,选择在gDNA(基因组DNA)还是CDS(编码区序列)上设计
引物
,取决于实验需求和
目的
。CDS上的引物设计因其特异性高而受到青睐。它们
直接
针对编码蛋白质的序列,这有助于避免引物与基因家族中的其他成员产生交叉反应,确保实验的准确性。另一方面,gDNA上的引物设计覆盖了特定基因的整个...
什么DNA RNA PCR
答:
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与
靶
序列
两端
互补的寡核苷酸
引物
。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与
引 物
...
环状的dna只扩增
目的基因
怎么弄 高中生物
答:
首先可以利用限制酶将
目的基因
切割下来,然后根据目的基因的部分碱基序列制作
引物
进行PCR扩增目的基因。
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