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wb内参是跟目的蛋白一起加吗
请问做western时
内参蛋白是
要
和目的蛋白
分开上样吗还是要
一起
上样
答:
只能一起上样
~样品里有你的目的蛋白还有内参等所有蛋白质~
wb
中一抗
和内参
怎么加的
答:
western blot实验中,完成电泳及电转膜之后,转完后将膜用
1
×丽春红染液染5min(于脱色摇床上摇)。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白,根据
目的蛋白
大小选择合适的内参,剪开目的蛋白及内参条带,分别进行目的条带一抗的孵育
和内参
的孵育。按照所用抗体说明书,用TBST按说明书建议比例稀释...
内参
配制方法
答:
内参
配制方法:
WB
操作简单,既可以定性分析表达产物,
同时
还可以指示
目的蛋白
量的相对变化。作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应是比较复杂的,因此用来测定表达产物时存在着一定的不确定性。所以,在WB实验设计中
加入
良好的参照体系,对实验结果分析是非常有帮助的。 参照体系通常包括分子量Marker(...
关于WESTERN BLOT的
内参
答:
肯定要加二抗啊,
内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白
,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性。如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗...
westernblot
内参蛋白
什么时候加
答:
内参检测的时候加
。在WB实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等常规步骤以外,还需要极其关键的一步,那就是内参检测,通过内参蛋白的表达量作为参照,校正蛋白定量和上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
wb一
抗
和内参是
分开孵的吗
答:
是。一抗是针对
目标蛋白
的特异性抗体,而
内参是
用于保证实验的可重复性和可比性的内源性参照蛋白,在实验过程中,通常先进行一抗的孵育,以检测目标蛋白的表达情况,然后在清洗掉未结合的一抗后,进行内参的孵育。
westernblot
内参
GAPDH成功了
答:
1.
蛋白
测定之后要加5X SDS上样缓冲液,该怎么加呢?是所有的标本
一起加
了,还是就算准备上样的量?经中心试验室CWW指点后才知道,可以一起加了。就是把蛋白样品的体积除以4就是了,这样的5Xbuffer就变为了1X。2.紧接着是配胶,也是一堆问题。过硫酸铵(AP),给我的是一支0.5g干粉,说明书说...
western blot
内参
actin 是43还是45 kda
答:
在Western Blot中使用
内参
其实就是在
WB
过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测
目的
产物的
同时
可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测
蛋白
转膜情况是否完全、...
wb
投稿
内参
只要放一张吗
答:
在WesternBlot中使用
内参
其实就是在
WB
过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测
目的
产物的
同时
可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正
蛋白质
定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白...
wb内参
用什么稀释
答:
稀释液。使用
与目的蛋白
相同的稀释液进行稀释,是
WB
法非常重要而必须的部分,这是为了确保蛋白上样的量
和目的蛋白
分子量之间的线性关系,以此为基础确定标准品稀释度,用于定量测定蛋白样品中目的蛋白的浓度。
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