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hrp标记抗体注意事项
HRP
(辣根过氧化物酶)
标记抗体
的原理及操作流程是什么 具体怎么弄_百度...
答:
HRP标记抗体
的方法:根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。戊二醛二步法原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。在不断搅拌下,每升滤液中慢慢加...
辣根过氧化物酶(
HRP
)
标记抗体
答:
标记抗体时,科赛格研发部门采用改良的高碘酸钠氧化法。首先,
透析处理含有游离氨基的抗体,确保反应纯净
。接着,将HRP与高碘酸钠在醋酸盐缓冲溶液中进行氧化反应,生成墨绿色溶液。随后,加入终止液终止氧化,溶液转为黄褐色。紧接着,将标记好的HRP与透析好的抗体混合,进行长时间的反应。添加NaHB4终止标记...
骨组织免疫组化实验步骤(
HRP
-DAB法)
答:
4. 封闭 5%BSA封闭液 37℃ 30min, 甩干不洗。 5. 孵育一抗 TBS或PBS稀释一抗。4℃湿盒过夜。6. 孵育二抗 TBS 5min×5。 3%H 2 O 2 滴加于切片上,室温避光10min。 滴加聚合
HRP标记
二抗,37℃,30min。 TBS 5min×5。 7. DAB显色 依照DAB...
酶标
抗体
制备技术的辣根过氧化物酶标抗体制备技术
答:
HRP分子量较小(40kDa),标记物容易穿透入细胞内部
;作用底物为H2O2,以二氨基联苯胺(DAB)为供氢体的反应产物为不溶性的棕色吩嗪衍生物,可用普通光镜观察;在pH3.5~12范围内稳定,对热及有机溶剂的作用亦较稳定,能耐受63℃加热15min;用甲苯与石腊包埋切片处理或用纯乙醇及10%甲醛水溶液固定...
酶联免疫法的酶
标记
法
答:
酶与抗体交联,常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的
HRP标记抗体
的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/...
酶
标记抗体
的介绍
答:
酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶
标记抗体
,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量的酶(如辣根过氧化物酶,简称
HRP
)国内已有...
酶
标记抗体
的简易过碘酸钠法
答:
本法是以NaIO4先将
HRP
表面的糖分子氧化成醛基,然后再与Ig上的氨基相结合,所获酶
标记抗体
的产率高,将近70%的HRP和Ig结合,99%的Ig与酶结合,酶与Ig的活性无重大损失,是目前最常用的方法。 (1) 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。(2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液,室温下避光...
免疫组化的操作步骤
答:
9 . 滴加 Primary
Antibody
Enhancer(增强子),在室温下孵育 20 分钟。10 .缓冲液洗 5min/2 次。11 .滴加
HRP
Polymer(酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。(注:HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)12 .缓冲液洗 5min/2 次。13 .向 1ml DAB...
求助
HRP标记抗体
纯化后抗体浓度的确定方法
答:
HRP标记抗体
纯化后抗体浓度的确定方法 一抗的用量和样品中的目标分子含量相关,如果含量较高,就不需要用太多一抗,以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度(义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果),如果样品与厂家的不是一种细胞,可以尝试上下摸索一两个浓度梯度;二抗的用量,和你...
hrp标记抗体
或抗原最常用的方法有哪些?
答:
免疫沉淀法:通过将细胞提取物与特定抗体结合,然后用蛋白A/G琼脂糖或其他手段将抗体和与其结合的抗原沉淀下来,最终检测抗原的存在。间接免疫荧光法:通过将标记有荧光染料的抗体与细胞或组织中的抗原结合,然后观察抗体-抗原结合的荧光信号来检测抗原的分布和表达水平。这些方法都是常用的用于
标记抗体
或抗原...
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