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hrp标记二抗
荧光
二抗标记
用
HRP
、AP、FITC、生物素法各发什么颜色荧光?
答:
这四个不是一码事,
HRP
和AP是酶,
二抗
上挂了酶,要给相应的底物才能显色,显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光(例如给予ECL底物,其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下,能在黑暗中发出荧光;也可以给予双氧水和DAB,反应产生棕色不溶于水的物质);FITC为异硫氰酸荧光素,本身就是黄绿色荧光,二抗结...
二抗
孵育时间
答:
二抗
孵育时间为1至2小时。参考二抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶(
HRP
)
标记
的二抗。吸尽洗涤液后,立即加入稀释好的二抗,室温在摇床上缓慢摇动孵育1至2小时。回收二抗。二抗的浓度一般要参照抗体说明书选择最适当的比例。一抗二抗的选择直接影响实验结果以及背景的深浅。要严格保证反...
流式荧光
二抗
孵育时间
答:
你好,你想问的是流式荧光
二抗
孵育时间是多少吗?流式荧光二抗孵育时间是1至2小时。参考流式荧光二抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶(HRP)
标记
的二抗。吸尽洗涤液后,立即加入稀释好的二抗,室温在摇床上缓慢摇动孵育1至2小时。因此,流式荧光二抗孵育时间是1至2小时。
HRP标记二抗
做免疫组化
答:
肿瘤组织中生物素含量很低,这个我不清楚。但是既然这样,你就不能用SABC法了,这样会引起非特异性染色。直接用一抗
二抗
来显色染色浅的话,你可以减小一抗二抗的稀释倍数,增大抗体浓度来增强显色。
只要是
HRP标记
的
二抗
都能做DAB显色吗?
答:
不能。
骨组织免疫组化实验步骤(
HRP
-DAB法)
答:
4. 封闭 5%BSA封闭液 37℃ 30min, 甩干不洗。 5. 孵育一抗 TBS或PBS稀释一抗。4℃湿盒过夜。6. 孵育二抗 TBS 5min×5。 3%H 2 O 2 滴加于切片上,室温避光10min。 滴加聚合
HRP标记二抗
,37℃,30min。 TBS 5min×5。 7. DAB显色 依照DAB...
关于western blotting,请各位高人指教
答:
用于检测整个WB实验过程及体系是否正常工作,并作为半定量检测目的蛋白表达量的标准对照。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。原理如下(
二抗
用
HRP标记
):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,将胶片进行扫描或拍照,用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。
hrp标记
过的抗体还可以杂
二抗
吗
答:
HRP标记
的抗体直接显示就可以了,不必要再杂
二抗
求助
HRP标记
抗体纯化后抗体浓度的确定方法
答:
HRP标记
抗体纯化后抗体浓度的确定方法 一抗的用量和样品中的目标分子含量相关,如果含量较高,就不需要用太多一抗,以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度(义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果),如果样品与厂家的不是一种细胞,可以尝试上下摸索一两个浓度梯度;
二抗
的用量,和你...
Western杂交中,为何要引入
二抗
?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者...
答:
这是使用
二抗
最基本的原因,多个二抗用来识别一抗,提高检测灵敏度。2.任何对一抗进行的
标记
或者修饰,都有可能造成一抗识别抗原能力的下降。实际上更多的二抗是用
HRP
或者AP来标记的(当然荧光染料的标记也是很重要的一种),但是这些酶或染料标记到抗体上后,采用的方法并不能选择标记在抗体的哪个位置,...
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