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载体与目的基因的连接
目的基因
与
载体的连接
方式有()
答:
正确答案:ABCD
基因表达
载体目的基因
与运载体结合
答:
基因工程的关键步骤之一是构建基因表达
载体
,即将
目的基因
与运载体相结合。这个过程可以视为DNA分子级别的重新组合。首先,以质粒为例,作为常用的运载体,它需要通过特定的限制酶进行处理。限制酶在质粒上创造出一个缺口,暴露出其黏性末端。接下来,目标的DNA片段,即目的基因,也会被相同的限制酶切割,形...
常用的
目的基因
与
载体的连接
方法有哪些
答:
第一种方法是,用DNA
连接
酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;(人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。)第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端脱...
t
载体连接
原理
答:
总的来说,T
载体连接
原理是一种基于DNA碱基互补配对和DNA连接酶催化的重组DNA技术。它在分子生物学实验中有着广泛的应用,可以用于
基因
克隆、基因表达、突变体筛选等方面。通过T载体连接,我们可以方便地将
目的
DNA片段插入到载体中,构建出符合实验需求的重组DNA分子。
基因工程中,实现
目的基因
与
载体
进行
连接
的酶是
答:
【答案】:D NA
连接
酶可催化DNA中相邻的5'-磷酸基和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键,使两个DNA 分子或片段连接。因此,在
基因
工程中,常利用DNA连接酶将外源DNA与载体连接起来。
【求助/交流】
目的基因
与表达
载体连接
时有哪些要点?
答:
建议在
连接
时,先加入
载体和目的基因
,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。适当延长连接时间24小时以内都没问题的!如果还是不行,就试试对载体去磷酸化,每一步处理都要在结束后热变性,失活残留的酶,适当加大
目的基因的
量(10以内),连接温度也可以在4-16度...
怎样确定
目的基因
正向
连接
答:
正向
连接
:即目的基因顺时针地按其上游到下游的方向与
载体
相连(与启动子的顺时针方向一致),这样,目的基因就能从上游到下游正常转录,表达产生所需的蛋白质,产生预期的性状。相关内容:目的基因也可以与质粒反向连接(反向连接),即
目的基因的
上下游方向颠倒地与载体相连,结果目的基因的转录从下游到上游,导致...
在基因工程中,将
目的基因
与
载体
DNA
连接
的酶是()
答:
【答案】:D 解析:在基因工程中,将
目的基因
与
载体
DNA
连接
的酶是DNA连接酶(D对),其可催化DNA中相邻的5'-磷酸基和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键,使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接。DNA聚合酶Ⅰ(A错)的功能是合成双链cDNA分子或片段连接、缺口平移法制作高比活性探针、DNA序列分析、...
当
载体与目的基因连接
不上时,应该怎么去进行载体优化
答:
当
载体与目的基因连接
不上时,应该去进行载体优化:目的基因具有从起始密码子到终止密码子的方向性,必须正向连接才能获得正确克隆,构建的载体才能正确表达目的蛋白。相同的限制性核酸内切酶及DNA连接酶。前者在供体和受体上分别进行切割,使
目的基因的
两端与运载体有相同的粘性末端,DNA连接酶则将其连接。理...
影响
目的基因
与
载体连接
效率的因素有哪些
答:
载体大小因素,连接酶的活性因素。1、载体大小:载体越大,
载体与目的
片段
的连接
效率越低,所以对于较大的载体用同源重组连接成功率最高。2、连接酶的活性:连接酶的活性对连接效率也有影响。
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