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载体与目的基因的连接
为什么要把
目的基因
导入
载体
答:
细胞中外来的DNA一般都会被降解掉,而且,就算进到细胞中,还要能复制,能表达才行。
载体
是自然条件下可以进入细胞,并且能够复制和表达的DNA,所以必需要借助载体才能进入受体细胞。PCR只能扩增
基因
片段,并不能表达,目前还没有脱离细胞进行的表达过程。
农杆菌转化法的过程
答:
2、基因表达
载体
的构建:将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA
连接
酶连接起来。3、将目的基因导入受体细胞:将含
目的基因的
重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。4、目的基因的检测与鉴定:用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定(这个方法需要导入重组后的细胞的植物体,详见...
为什么不直接把
目的基因
导入受体细胞,而要用
载体
答:
游离的DNA进入细胞体,一般会直接被分解,就算可以进行转录——翻译成蛋白,游离DNA也无法跟着细胞分裂进行复制,导致子代细胞中不再含有
目的基因
,也就是说,你费力将基因导入受体细胞,结果只有一个细胞被改变了,整个群体细胞菌落不会有可观察的任何变化。而将基因接入
载体
,由于载体可以在细胞内复制,随着...
基因
表达
载体的
构建
答:
插入的
目的基因
只是结构基因部分,其表达需要调控序列,因而用作
载体的
质粒的插入部位前须有启动子,后须有终止子。2、通过载体把目的基因片段导入活细胞。构建基因表达载体也就是把目的基因和
载体连接
,使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
如果我把
目的基因连接
到质粒
载体
上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么...
答:
你的基因应该是插入到多克隆位点上的,那多克隆位点前面的序列就是你的启动子了。启动子就是直接驱动你的
基因的
序列。
获得植物转
基因
植物需要哪些步骤
答:
因此,细菌来源的基因,也可以在植物中起作用。通过序列比对和分析,并加上如今丰富的基因组数据库,我们可以很容易的找到和确定目标
基因的
序列。然后,利用最常用的PCR手段,就能将我们所需的基因片段,从原来的生物基因组中克隆出来。二、
载体
构建把这一段
目的基因
,通过酶
连接
到一个特定质粒分子上,构成...
构建基因表达
载体
时,必须用什么处理
目的基因和
受体细胞
答:
你好,构建表达
载体
时必须用相同的限制性核酸内切酶处理
目的基因
和运载体,使他们拥有共同的黏性末端,从而可以
连接
在一起,导入受体细胞的时候根据受体细胞种类的不同方法不同,如果说处理的话,应该指的是导入微生物细胞,应该用Ca+处理受体细胞,使其变成能自主吸收周围dna的状态,此细胞也称之为感受态...
做
连接
的时候如何确定
载体与目的基因的
量,我虽然知道摩尔质量比为3:1...
答:
先算出你的
载体和目的基因的
浓度,(可以跟mark的亮度对比估算,也能用软件计算),再根据摩尔质量比和基因的大小算出质量比,再算出体积比就行
扩增产物
和
质粒在什么作用下实现
目的基因的连接
?
答:
扩增产物和质粒在分子生物学上主要用于
连接
目的基因。扩增产物是在PCR(聚合酶链反应)中通过扩增技术生成的新的DNA分子。这些分子通常是某个
目的基因的
多个副本,可以用于进一步分析、鉴定或克隆。质粒是一种DNA分子,它们在生物学上被用来存储和转移遗传信息。在基因工程中,质粒通常用作
载体
,用于将目的...
找一种纤维素酶,找到他们的
基因
序列,设计好扩增引物,PCR实验;找到...
答:
klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。为了减少载体自连,可以用碱性磷酸酶处理载体。最后将
载体和目的基因
链接,构建重组质粒。2.设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变
目的基因的
酶切位点,然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因,切出相同的粘性末端。直接将酶切完成的目的基因和
载体连接
。
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