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设计定量pcr引物
荧光
定量PCR
(qPCR)——
引物设计
篇
答:
荧光
定量PCR
(qPCR)的
引物设计
至关重要,它直接关系到实验的准确性和效率。设计时需考虑的关键因素包括特异性、扩增效率和产物长度。以下是几个关键步骤:首先,引物设计需跨越内含子,确保扩增产物只来自cDNA,消除gDNA污染可能带来的干扰。其次,引物长度应控制在18-30nt,产物长度保持在100-300bp,避免...
普通pcr引物设计和荧光
定量pcr引物设计
的区别
答:
一、方法不同 1、普通pcr引物设计:引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光
定量pcr引物设计
:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记跟踪PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度 二、原理不同 1、普通pcr引物设计:为了找到一对合适的核...
设计定量引物
的参考序列是什么
答:
目的基因的mRNA。1、
定量引物
序列与目标基因的外显子区域相结合,可以通过
PCR
扩增目标基因的特定片段。2、实时荧光
定量PCR
技术进行定量分析,可以准确地检测和计算起始模板数量。3、设计定量引物序列需要考虑引物的特异性和扩增效率,以确保准确的定量结果。
q
PCR引物
怎么
设计
答:
PCR
反应,这个基础技术,是DNA聚合酶在体外条件下复制DNA的接力赛。
引物
,作为这场复制的导火索,是DNA复制过程中不可或缺的短序列,它们必须与目标DNA精确匹配,才能启动复制的链条。以目标序列5’-ATGAATCGCGGCTGCAACACAGATATAGGGCCATACGG-3’为例,
设计
上游引物5'-ATGAATCGCG-3’和下游引物5'-CCGT...
实时荧光
定量PCR
中两种
引物
的
设计
有什么要求
答:
参照以下real-time
PCR引物设计
原则:1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大。4.G+C含量在40%~60%之间,45-55%最佳。5.碱基要随机分布,...
如何
设计
荧光
定量PCR的引物
及TaqMan探针
答:
1, 先选择好探针,然后
设计引物
使其尽可能的靠近于探针。2, 扩增子的长度应不超过400bp,理想的最好能在100-150bp内,扩增片断约短,有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性 3, 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致扩增效率的...
荧光
定量PCR引物
为什么要跨内含子
设计
?
答:
荧光
定量PCR
的扩增区段比较小,也就200bp左右,而且一般以cDNA为模板。如果不注意
引物设计
的话,很可能落在同一个外显子内。此时,无论cDNA还是基因组DNA都会给出同样的信号,也就是说定量会出现误差。如果引物跨内含子,则cDNA会给出信号,而基因组DNA由于引物无法完全配对而没有信号,也就避免了基因...
做荧光
定量PCR
,但是不知道内参的序列,如果NCBI上没有该怎么
设计
内参的引...
答:
啥都没有的话是无法
设计
的 首先你可以克隆获得内参的序列,再进行下一步实验
实时荧光
定量PCR
中两种
引物
的
设计
有什么要求
答:
6、Frq曲线为Oligo6软件新引进的一个指标,解释了序列片段存在的重复几率大小,选取
引物
时,应该用Frq值相对较低的片段;7、引物二聚体及发卡结构的能量的绝对值一般不要超过4.5,否则容易产生引物二聚体而且会降低引物浓度从而导致
PCR
不能正常发生;8、3'端最好不要是连续碱基,GGG或CCC会导致错误的...
荧光
定量PCR的引物
怎么
设计
答:
1、查找该物种或近缘物种信息,看是否能确定内含子序列的位置,在CDS上
设计
跨内含子的
引物
,以避免基因组污染;2、扩增片段大小最好在200bp左右,太大会影响扩增效率;3、最好一次分别设计两条上游(距离较近)和下游引物(距离较近),组合成4个扩增片段;4、用任何方法或软件设计好的引用都要用少量...
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