55问答网
所有问题
当前搜索:
rt pcr引物设计原则
引物设计原则
是什么?
答:
一、引物设计有3条基本原则:
1、引物与模板的序列要紧密互补。2、引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构
。3、再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。二、PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述,引物的优劣直接关系到PCR的特异...
引物
的
设计原则
答:
引物设计原则
1、长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38
,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。2、G十C含量:应在40%一60%之间,PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时,其Tm恒等于4...
引物设计原则
是什么?
答:
一、特异性原则 引物设计应当确保特异性,即引物需要与模板DNA序列独特匹配,避免与其他非目标序列产生交叉反应
。这要求引物序列在目标基因序列中是独特的,以减少非特异性产物的生成。二、长度与Tm值原则 引物的长度一般介于18至30个核苷酸之间,过短可能导致结合不稳定,过长则可能增加合成成本及退火时间。
【科研】
PCR引物设计原则
答:
2、③引物内部不应出现互补序列。④两个引物之间不应存在互补序列,尤其是避免3′端的互补重叠
。3、PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。4、引物设计原则长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38...
引物设计原则
答:
引物设计原则是:
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp
。2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5到3’的下降形状也有利于...
pcr引物设计
的基本
原则
有哪些
答:
PCR引物设计
的11条黄金法则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度(primerlength...
【科研】
PCR引物设计原则
答:
引物设计
是决定
PCR
反应成败的最重要因素。引物设计有两个主要考虑因素:特异性和扩增效率。特异性是由错配的频率决定的,特异性差的引物易产生错误的扩增产物。扩增效率是指引物以每循环增加两倍扩增产物达到理论最优的能力。遵循
原则
如下:1. 引物长度:引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整...
PCR引物设计
的PCR引物的
设计原则
答:
1. 引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。2.产物不能形成二级结构。3. 引物长度一般在15~30碱基之间。4. G+C含量在40%~60%之间。5. 碱基要随机分布。6.
引物自身
不能有连续4个碱基的互补。7.
引物之间
不能有连续4个碱基的互补。8. 引物5′端可以修饰。9. 引物3′端不可修饰。10. ...
引物设计原则
答:
PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功,但遵循某些原则,则有助于引物的设计。引物设计有 3 条基本原则:
首先引物与模板的序列要紧密互补
,其次引物与...
在
pcr
实验中,
引物
的
设计
一般有哪些要求
答:
引物设计原则
:长度: 18~30 bp, 20 bp左右最为常用。引物过短易导致非特异性打增;较长引物特异性强,但退火效率低,且易形成二级结构,从而导致
PCR
产量少。二级结构:引物二聚体及发夹结构的能值过高(大于4.5 kcal/mol )易导致产生引物二聚体带,并且降低有效引物浓度,使PCR反应不能正常...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
简述pcr引物设计的基本原则
pcr技术引物设计的原则
rtpcr引物必须考虑
引物选择的原则
PCR引物设计过程
rtpcr检测基因表达
rtpcr需要的酶
RT-PCR实验
rtpcr原理及步骤