55问答网
所有问题
当前搜索:
蛋白免疫印迹注意事项
在
免疫印迹
实验检测
蛋白
的实验中应该
注意
什么问题
答:
溢出瓶外,造成氮的损失,
所以消化前可加入少量消泡齐lj.如:液体石蜡
、硅消泡剂等.4.催化剂的加入量要适宜硫酸铜是最理想的催化剂,效果好,价格便宜,环境污染小,而且是蒸馏加碱时的指示剂.硫酸钾可加快有机物的分解,使硫酸沸点从34.0℃提高到40.0℃以上,但加入量不能太大,否则温度过高会使铵盐...
Western blot 实验技术及常见问题分析?
答:
答:必须进行研磨、匀浆、超声处理
,蛋白质溶解度会更好,离心要充分,膜蛋白需用更剧烈的方法抽提,低丰度膜蛋白可能还要分步抽提(超速离心)。还有一点就是组织中的蛋白酶活性更强,需要注意抑制蛋白酶的活性。 11 免疫组化和Western Blot可以用同一种抗体吗? 答:免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇(又称...
蛋白免疫印迹
( Western Blot)详细操作步骤
答:
最后,
务必注意实验细节,如膜处理、洗涤、封闭液配制、发光液反应和问题解决策略
。所有试剂、耗材如PVDF膜、滤纸、枪头以及缓冲液,如Acr/Bis、过硫酸铵等,应按照要求进行精确配制和保存。通过这些精心步骤,Western Blot将帮助你深入了解蛋白质世界,揭示那些隐藏在细胞内的秘密。
实验干货 |
蛋白免疫印迹
( Western Blot)从基本原理到实践操作步骤...
答:
走进常规操作流程,从样品准备开始。首先,
对细胞或组织进行匀浆处理,确保组织充分粉碎,冰镇并重复碾磨,确保裂解效率。离心后,上清液冷藏待用
,细胞总蛋白提取则涉及培养液收集、洗涤、PMSF裂解及离心收集上清。测定蛋白含量是关键一步:通过制作BSA标准曲线,精确测量样品中的蛋白质含量,确保实验的准确性。
western blotting的原理、操作步骤及意义
答:
注意事项:
western blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态,空间结构改变,因此那些识别空间表位的抗体不能用于western blot检测
。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化,再用酶标记亲和素进行western blot。实验中取胶和膜需带手套。 Western可以参考如下步骤进行操作。 1.收集蛋白样品...
做
蛋白质免疫印迹
时一抗和marker怎么选择?
答:
一抗要针对你的目的
蛋白
选择特异性很强的相应抗体就可以了的,一般选择抗体说明书上说专门针对WB使用的抗体,而且一般应选择效价较高的抗体。而MARKER则要取决于你的目的蛋白的分子大小了,选择相应的marker,marker最好要能比较容易的区分条带是否为目的蛋白,即在目的蛋白这一分子大小附近最好是能区分度...
蛋白印迹
用恒压还是恒流
答:
蛋白质印迹
的发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为Western Blot。
蛋白免疫印迹
( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上...
western blot 具体操作步骤
答:
转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做
免疫印迹
。将有
蛋白
标准的条带染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脱色,至背景清晰,然后用双蒸水洗,风干夹于两层滤纸中保存,留与显色结果作对比。(四)免疫反应:1、用0.01M PBS洗膜,5min ×3次。2、加入包被液,平稳摇动,室温2hr...
免疫
印记检测法
答:
1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作;2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔;3、
免疫印迹
分析只需少量试剂;4、 孵育、洗涤的时间明显减短;5、可同时制作多个拷贝, 用于多种分析和鉴定;6、结果以图谱形式可长期保存;7、 免疫探针可通过降低PH值等方法...
免疫印迹
法是什么意思?
答:
首先,样品
蛋白质
会通过电泳的方式在凝胶上进行分离,然后将凝胶转移到亲水性的膜上,接着用抗体探针针对特定的蛋白质进行化学反应,最后通过特定的检测方法来得出目标蛋白的信息。
免疫印迹
法广泛应用于蛋白质的检测,包括检测免疫相应性,检测蛋白质表达水平,以及检测蛋白质修饰和结构等。在生物医学研究中,...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
蛋白质免疫印迹实验步骤
蛋白免疫印迹法原理及步骤
蛋白质免疫印迹实验注意事项
western blot注意细节
蛋白质免疫印迹实验原理
WB蛋白变性时间过长有啥影响
蛋白质印迹法注意事项
Wb蛋白用水稀释
免疫印迹法原理