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蛋白免疫印迹注意事项
载脂
蛋白
E
免疫印迹
法检测ApoE表型
答:
载脂
蛋白
E的
免疫印迹
法检测是一种便捷且准确的表型检测技术,它替代了原有IEF法,后者由于设备需求大、工作量繁重,限制了其在临床应用中的广泛使用。免疫印迹法以血清(或血浆)为样本,首先通过脱脂处理,然后进行IEF电泳,利用特异性多克隆或单克隆抗体进行免疫印迹反应,通过观察黑色后图谱即可确定ApoE的...
Western
免疫印迹
原理
答:
接下来,以固相载体上的
蛋白质
或多肽作为抗原,与对应的抗体发生
免疫
反应。抗体与抗原结合后,再与酶或同位素标记的第二抗体发生反应。这一过程的目的是为了检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。最后,通过底物显色或放射自显影来观察反应结果,从而判断特定蛋白的表达情况。Western
印迹
技术的这一系列...
免疫
印记检测法
答:
结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同种
蛋白
的表达量差异。优点
免疫印迹
法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点:1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作;2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔;3、 免疫印迹分析只需少量试剂;4、 孵育、洗涤的时间...
蛋白
PAGE电泳后,不能及时转膜,能否把胶保存一段时间再转呢?
答:
2、转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好,滤纸、凝胶、NC膜精确对齐,每一步去除气泡,上压重物,将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流,转移1.5h。3、转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做
免疫印迹
。将有
蛋白
标准的条带染色,放入...
三种
印迹
技术的原理及区别
答:
操作方法与Southern blotting相似,但不需要限制性内切酶切割。3、
蛋白质
的
印迹
分析(Western blotting)与Southern或 Northern杂交方法类似,但Western采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色"用标记的二抗,该检测技术往往需要抗体。三种印迹技术的特点:1、预定性,即它可以...
免疫印迹
法的阶段
答:
免疫印迹
法分三个阶段进行.第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):抗原等
蛋白
样品经SDS处理后带阴电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快.此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带).第二阶段为电转移:将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维...
P38的
免疫印迹
内参怎么选择
答:
蛋白免疫印迹
是个半定量的方法,可以粗略的看蛋白表达高了还是低了。精确的得用酶联免疫或者荧光等。组织中总有一些蛋白,表达是非常恒定的,不受一般的化学条件影响,如βactin,GAPDH等,这些蛋白就适合做内参,所有我们化学发光显影的时候,必须把内参蛋白和目的蛋白同时显出来,通过内参蛋白光密度值,将...
western blot原理
答:
通过在
蛋白质
上施加电流,将蛋白质从凝胶中转移到膜上。常用的转印膜包括聚偏氟乙烯(PVDF)膜和硝酸纤维素膜。四、蛋白质检测和分析 在蛋白质转移至膜上后,需要进行蛋白质检测和分析。第一步是阻断,即使用蛋白质结合抑制剂将膜上的非特异性结合位点阻断,避免
免疫
检测的背景干扰。第二步是免疫检测...
免疫印迹
法的免疫印迹法
答:
免疫印迹
法 是将
蛋白质
转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3...
蛋白
翻译后修饰做wb会使蛋白条带升高么
答:
WB检测
蛋白
表达量,一些修饰会使条带变大,例如糖基化的蛋白跑电泳会比非糖基化的条带大。但是对蛋白表达量无影响 高保真生物技术有限公司~实验整体外包服务商~
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