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细胞周期检测固定
细胞周期检测
方法即PI法的操作步骤
答:
1. 细胞培养:取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。2.
细胞固定
: 800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。3. 细胞染色:1...
流式细胞仪观察
细胞周期
样品怎样准备
答:
根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先
固定
,然后加RNA酶和PI,半个小时左右上机
检测
就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动
细胞
,避免细胞黏连在一起.(1)细胞培养 取对数生长期的细胞,按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后,加入...
求
细胞周期检测
方法:PI法操作步骤
答:
1、0.25%胰酶(无EDTA)消化,将
细胞
消化成单个。(必须消化成单个)。2、离心收集细胞,弃上清,用预冷PBS洗细胞两次(加3ml,吹悬,离心,弃上清算洗一次)。3、加入3ml预冷(-20度)70%乙醇到细胞沉淀中,于4度
固定
过夜(或者,如果实验
周期
长可以-20℃长期固定)。4、离心收集细胞,以3mL的P...
细胞周期
如何
检测
?
答:
主要操作步骤如下:①组织块用0.25%胰酶消化30min~1h。②200~400目筛网过滤细胞,获得单细胞悬液。③75%乙醇(-20℃预冷)
固定细胞
1h。④加入PI(终浓度50g/mL)和无DNA酶污染的RNA酶(终浓度50g/mL)1mL染色30min~1h。⑤流式细胞仪
检测细胞周期
和凋亡 细胞凋亡情况观察及凋亡率检测 培养48h...
细胞周期
中限制点和
检测
点?
答:
细胞周期
检验点 细胞周期检验点(checkpoint)是细胞周期调控的一种机制,主要是确保周期每一时相事件有序、全部完成并与外界环境因素相联系。 G1/S检验点:在酵母中称start点,在哺乳动物中称R点(restriction point),控制细胞由静止状态的G1进入DNA合成期,相关的事件包括:DNA是否损伤?细胞外环境是否适宜...
Annexin Ⅴ-FITC/PI能否用于测定
细胞周期
答:
Annexin V-FITC/PI是用来测细胞凋亡的,测
细胞周期
可以用其中的PI,但用Annexin V-FITC/PI来测细胞周期比较浪费试剂。测细胞周期的大致步骤如下:1. 收集1 x106个细胞,1500rpm离心5 min,弃上清。同样离心条件下,用4℃预冷的PBS洗细胞两次。2. 完全去除上清,加入-20℃预冷的70%乙醇1 ...
细胞周期
DNA
检测
答:
在进行
细胞周期
DNA
检测
时,首先需要准备相应的样品。可供选择的样本包括组织单细胞悬浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞)以及组织培养细胞,或者使用Ficoll-hypaque分离得到的单核细胞。反应体系的构建至关重要,DNA低渗缓冲液的配方包括柠檬酸三钠0.25g,Triton-X 100 0.75ml,碘化丙啶0.025g,核糖...
细胞周期检测
实验中细胞染色最佳时间
答:
24小时内。
细胞周期检测
实验是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,其中细胞染色最佳时间是24小时内,荧光强度与PI的结合量呈良好的线性关系。染色是生物显微玻片标本制作中最重要的环节之一。
流式
检测细胞周期
都有哪些染色方法
答:
从分类上来说,一般有两类:第一类是只染DNA。这类方法比较简单,用酒精
固定细胞
后,直接加含有RNA酶的荧光染料,比如PI等,然后就可以直接上机。第二类另外加了一个步骤,在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物,比如BrdU或者EdU。细胞新合成的DNA上就会有这些物质。在不同时间点收集细胞,用DNA染料染DNA的...
细胞周期
实验加药多久后收集细胞
答:
1-2天。1、用药后1-2天收集细胞做
细胞周期
的FCM
检测
,一个孔的细胞便足够了,所以加药后1-2天便可以收集细胞。2、细胞周期测定实验原理:体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。
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